文/梁思源 吕春爽 安红艳 李全振 赵宝华

锦鲤疱疹病毒ORF126-ORF27融合蛋白的表达及免疫原性分析

文/梁思源1吕春爽1安红艳1李全振2赵宝华1

根据锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus，KHV）囊膜蛋白ORF27基因和糖蛋白ORF126基因序列设计特异性扩增引物，通过PCR成功克隆了锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus，KHV）ORF27基因和ORF126基因片段，分别将ORF27基因、ORF126基因以及ORF126-ORF27融合基因与原核表达载体pMAL-c2x连接构建重组表达质粒pMAL-c2x-ORF126，pMAL-c2x-ORF27，pMAL-c2x-ORF126-ORF27，并转化受体菌BL21（DE3），筛选得到重组菌株BL21（DE3）（pMAL-c2x-ORF126），BL21（DE3）（pMAL-c2x-ORF27），BL21（DE3）（pMAL-c2x-ORF126-ORF27）。IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析表明均产生大量目的蛋白；Western blotting分析显示目的蛋白均具有良好的的免疫原性；表达的蛋白与佐剂1:1震荡乳化后免疫小鼠，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中的抗体效价。结果表明重组菌株BL21（DE3）（pMAL-c2x-ORF126-ORF27）的血清抗体效价明显高于单蛋白，本试验研究结果为进一步开发研制锦鲤疱疹病毒病基因工程疫苗奠定了基础。

鲤鱼是我国淡水养殖主要品种之一，锦鲤疱疹病毒病可导致发病鲤鱼的大量死亡。锦鲤疱疹病毒病（Koi herpesvirus dasease，KHVD）的病原体为锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus，KHV），属于异疱疹病毒科鲤鱼病毒属，是一种线性、双链DNA病毒，基因组大小约为295kb。1998年从美国和以色列的患病鲤鱼中首次分离出锦鲤疱疹病毒，随后该病毒在世界各地陆续发现并报导2002年4月在广东省某锦鲤养殖场进口的锦鲤中首次发现锦鲤疱疹病毒感染，后经nested-PCR检测证实导致锦鲤死亡的病原体为KHV，该病具有高传染性和高致病性等特点，春夏秋季节为该病的高发期，病情一旦爆发，难以控制，严重时致死率可达90%以上，目前还不具备有效的药物对其进行治疗，因此，采用免疫接种的方法来预防该疾病的发生和传播具有重要的现实意义。……