王圣洁 王胜坤 林彩丽 于少帅 汪来发 朴春根 郭民伟 田国忠

(1.中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 国家林业局森林保护学重点实验室 北京 100091; 2.中国林业科学研究院热带林业研究所 广州 510520)

以tuf基因为靶标的5种16SrⅠ组植原体环介导恒温扩增技术*

王圣洁1王胜坤2林彩丽1于少帅1汪来发1朴春根1郭民伟1田国忠1

(1.中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 国家林业局森林保护学重点实验室 北京 100091; 2.中国林业科学研究院热带林业研究所 广州 510520)

【目的】 建立一种能够特异性检测和鉴定16SrⅠ组植原体的环介导恒温扩增技术，实现16SrⅠ组植原体的快速检测。【方法】 以植原体tuf基因作为靶标，通过序列比对，设计多组具有特异性的LAMP引物组，筛选出一套适用于16SrⅠ组植原体的特异性检测体系。以16SrⅡ组、16SrⅤ组、16SrⅩⅨ组植原体样品按照此检测体系进行反应，来验证其特异性； 同时将稀释后的感病组织样品同步进行PCR和LAMP检测，以确定其检测灵敏度。对来自不同省市的6份田间样品以及9份组培样品进行检测，以验证其检测的稳定性。【结果】 16SrⅠ-LAMP在恒温63 ℃条件下40 min内完成扩增，能检测5种分别引起泡桐丛枝、苦楝丛枝、桑树萎缩、莴苣黄化和长春花绿变病的16SrⅠ组植原体，不能检测其他组植原体包括16SrⅡ组的花生丛枝、甘薯丛枝、臭矢菜丛枝、16SrⅤ组的枣疯病、红花槐丛枝、樱桃致死黄化和16SrⅩⅨ组的板栗黄化皱缩植原体。通过在反应液中加入钙黄绿素肉眼判断绿色为阳性结果，褐色为阴性结果，与用荧光定量设备进行判读扩增曲线的结果一致。……