闫文凯 林文武 杨文婷 杜雅馨 吴祖建 杨 靓

(福建农林大学植物病毒研究所 福建省植物病毒学重点实验室 福州 350002)

竹花叶病毒福州分离物基因组序列分析及其侵染性克隆的构建*

闫文凯 林文武 杨文婷 杜雅馨 吴祖建 杨 靓

(福建农林大学植物病毒研究所 福建省植物病毒学重点实验室 福州 350002)

【目的】 研究BaMV福州分离物BaMV-TMS1及其携带的卫星RNA(satBaMV)分离物satBaMV-TMS1的全基因组特征，明确其系统发育关系； 对BaMV进行cDNA侵染性克隆构建方法的改进，为其反向遗传学体系的快速建立提供简便的方法。【方法】 根据已报道的BaMV和satBaMV全长序列保守区分别设计2对和1对扩增引物，从感染BaMV的竹叶中扩增、克隆获得BaMV-TMS1和satBaMV-TMS1的全长序列，并进行序列特征分析和系统发育树构建。采用多片段无缝克隆方法将扩增得到的2个病毒DNA片段和载体进行连接并转化农杆菌，接种本氏烟后检验其侵染性。【结果】 测序获得的BaMV-TMS1和satBaMV-TMS1分离物核苷酸序列全长分别为6 366和834 nt(不含3′端的多聚腺苷酸尾)，具有典型的BaMV和satBaMV基因组结构特征。BaMV-TMS1分离物与已报道的其他分离物序列同源性为82%～83%，而satBaMV-TMS1分离物与其他分离物的序列同源性为92%～93%。系统进化树分析表明，BaMV-TMS1分离物可单独形成一簇，satBaMV-TMS1分离物也单独形成一个新的分支。侵染性克隆通过农杆菌注射接种本氏烟10天以后，RT-PCR检测以及透射电镜负染观察结果都验证病毒成功侵染。【结论】 BaMV-TMS1和satBaMV-TMS1分离物与已知序列有着较高的变异度且生成新的系统发育树分支，体现了该病毒与卫星RNA较高的遗传多样性。……