赵益文，赵佳，庞全海



褪黑素对大鼠胰岛瘤细胞INS-1胰岛素和Gαi/o蛋白基因表达的影响

赵益文1，赵佳2，庞全海1

（1山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801；2北京大学分子医学研究所，北京100871）

【目的】研究褪黑素对大鼠胰岛瘤细胞INS-1中胰岛素和Gαi/o蛋白基因表达的影响，探究褪黑素在mRNA水平对和1调节作用中可能存在的分子机制。褪黑素(melatonin, MT)是松果腺分泌的一种吲哚类神经内分泌激素，在机体内可调节胰岛素的分泌而使其呈现昼夜节律性分泌，影响葡萄糖昼夜代谢水平的变化进而维持机体血糖的相对恒定，故对于褪黑素影响胰岛素表达的研究可能会对褪黑素在胰岛素昼夜节律性分泌中的调控作用提供依据。【方法】将冻存的INS-1细胞复苏培养至第三代，INS-1细胞传代后,用RPMI1640培养基培养INS-1细胞约24—48 h，当细胞密度达60%—70%时，使用无血清无葡萄糖的RPMI1640洗2次，然后在INS-1细胞培养外液中分别加入不同浓度（0、10、20、30、50 mmol·L-1）的葡萄糖及100 nmol·L-1褪黑素和不同浓度葡萄糖孵育INS-1细胞12 h，观察和统计INS-1细胞的形态学变化。利用EasyPure® RNA Kit 提取INS-1细胞的总RNA，核酸蛋白测定仪测定细胞总RNA的浓度和纯度，其次利用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测细胞的总RNA质量，TransScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix反转录合成cDNA。利用Primer Premier 5.0引物设计软件，参考GenBank上已登录的基因序列进行1、12、和引物的设计。应用qRT-PCR法进行检测处理后的INS-1细胞1、12、和mRNA水平的变化。【结果】用含不同浓度葡萄糖培养液孵育INS-1细胞后，观察发现随着培养基中葡萄糖浓度含量的增加INS-1细胞突触的增长呈现先增加后减少的趋势，其中20 mmol·L-1葡萄糖处理组INS-1细胞突触的增长明显，而20 mmol·L-1葡萄糖和100 nmol·L-1褪黑素处理组INS-1细胞表面积增大，但突触增长却不明显；……