崔强华,孙 莉,吴 琳,方 萍

(1.陕西省汉中市人民医院儿科 723000；2.西安交通大学第二附属医院呼吸内科，西安 710004)

论著·临床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.25.012

EB病毒感染对儿童传染性单核细胞增多症T细胞亚群的影响

崔强华1,孙 莉1,吴 琳1,方 萍2

(1.陕西省汉中市人民医院儿科 723000；2.西安交通大学第二附属医院呼吸内科，西安 710004)

目的观察EB病毒(EBV)感染对儿童传染性单核细胞增多症(IM)T细胞亚群的影响。方法选取2013年1月至2016年1月陕西省汉中市人民医院儿科收治的80例IM患儿作为研究对象，所有患儿均接受抗病毒治疗，观察患儿治疗后的EBV-DNA转阴率。比较EBV-DNA阳性及阴性患儿的T细胞亚群分布，分析EBV-DNA未转阴的相关因素。结果经过治疗后，67例(83.75%)患儿EBV-DNA转阴。治疗后，EBV-DNA阴性组CD3+和CD8+比例低于EBV-DNA阳性组，CD4+比例和CD4+/CD8+高于EBV-DNA阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)。对患儿EBV-DNA未转阴的相关因素进行分析：性别、白细胞计数(WBC)及淋巴细胞计数与EBV-DNA转阴无相关性(P>0.05)，干扰素的使用、年龄及初始Ct与EBV-DNA未转阴具有相关性(P<0.05)。结论EB病毒感染可以引起IM患儿T细胞亚群的紊乱，临床上应采取积极的抗病毒治疗。

疱疹病毒4型，人；传染性单核细胞增多症；T细胞亚群

传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis，IM)是由EB病毒(EBV)感染导致的急性传染病，患者以儿童和青少年为主，但部分患儿可能出现爆发性肝炎、心肌炎、噬血细胞综合征等严重的并发症[1-2]。研究发现，IM患儿存在免疫功能异常，患儿自然杀伤细胞(NK)和T细胞功能过度激活，导致免疫性损伤[3]。本研究旨在观察EBV感染对IM患儿T细胞亚群的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2013年1月至2016年1月陕西省汉中市人民医院收治的80例IM患儿作为研究对象，其中男45例，女35例，年龄2～10岁，平均(5.9±2.4)岁。纳入标准[4]：(1)所有患儿均以发热、咽炎及扁桃体炎等症状入院，并经过血常规及白细胞分类计数检查；(2)患儿血清EBV衣壳抗原IgM抗体(EB-VCA-IgM)检测阳性；(3)患儿家长均自愿参与本研究，并签署知情同意书。排除标准：(1)合并有心肌炎、肝炎、溶血性贫血及血小板减少的病情危急的患儿；(2)入院前2周内有免疫调节剂及糖皮质激素使用史的患儿。选取健康儿童40例作为空白组，男22例，女18例，年龄2～11岁，平均(5.9±2.7)岁。两组儿童的性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2治疗方法 所有患儿在基础护理及对症治疗(卧床休息、降低体温及预防感染等)的基础上使用更昔洛韦(亚宝药业集团股份有限公司，批号：151201)10 mg/(kg·d)静脉滴注，部分患儿联合应用注射用重组人干扰素αIb(深圳科兴生物工程有限公司，批号：201607054)肌内注射，10～30万U每天1次，或者30～50万U隔日1次。患儿治疗持续7 d。

1.3观察指标 (1)所有患儿在治疗前及治疗7 d后检测EB病毒DNA(EBV-DNA)水平。EBV-DNA检查采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，ABI Prism7300荧光定量PCR仪购自上海迪普生物技术有限公司。将咽拭子或全血标本按照说明书进行处理和DNA提取，并加入26 μL的DNA检测体系中，将反应管放入样品槽中进行扩增及检测：50 ℃预反应2 min，94 ℃预变性5 min，每个循环包括94 ℃10 s，60 ℃ 40 s，共进行50个循环。标本荧光强度曲线达到阈值时所需循环数(Ct值)≤39为阳性，记录患儿治疗前后的Ct值。(2)比较治疗7 d后EBV-DNA阳性及阴性患儿的临床资料，包括年龄、性别、初始的Ct值、白细胞计数(WBC)及淋巴细胞计数以及治疗过程中干扰素的使用情况。分析患儿EBV-DNA未转阴的影响因素。(3)患儿在治疗前及治疗7 d后均采集空腹静脉血5 mL，对照组在疫苗接种前采集空腹血5 mL，加入抗凝试管中。取100 μL抗凝血置于计数管内，检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+及NK细胞(CD16+CD56+)，试剂盒由贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司提供。比较不同时刻EBV-DNA阳性及阴性患儿的T淋巴细胞亚群变化。

2 结 果

2.1EBV-DNA阳性及阴性患儿的基线资料比较 治疗7 d后，67例(83.75%)患儿EBV-DNA转阴。EBV-DNA阳性及阴性患儿的性别、初始WBC及初始淋巴细胞计数的差异无统计学意义(P>0.05)，干扰素的使用、年龄及初始Ct值的差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2患儿EBV-DNA未转阴的相关因素分析 对患儿EBV-DNA未转阴的相关因素进行分析：性别、WBC及淋巴细胞计数与EBV-DNA转阴无显著相关性(P>0.05)，干扰素的使用、年龄及初始Ct与EBV-DNA未转阴有相关性(P<0.05)，见表2。

2.3患儿治疗前后外周血T淋巴细胞亚群变化 与空白组相比，两组患儿治疗前CD3+和CD8+比例升高，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比，患儿治疗7 d后，CD3+和CD8+比例降低，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+升高，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后，观察组的CD3+和CD8+比例低于对照组，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；治疗后CD16+CD56+的差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表1 EBV-DNA阳性及阴性患儿的基线资料比较

表2 患儿EBV-DNA未转阴的相关因素分析

表3 各组的淋巴细胞变化

g*：P<0.05，与空白组比较；**：P<0.05，与EBV-DNA阳性组比较；#:P<0.05，与治疗前比较

3 讨 论

IM是由EBV感染引起的单核-巨噬细胞系统的急性增生性疾病，小儿较易发。近年来，IM的发病率呈现上升趋势，且诊断具有一定的困难，应该引起临床上的重视[5]。目前，临床上关于EBV感染及抗病毒治疗在IM患儿中的疗效尚存在一定的争议[6-7]。但是大量临床及基础研究证明IM患儿存在继发性的免疫损伤，故抗病毒药物单独应用效果不理想。

本研究选取40例健康儿童作为对照组，两组IM患儿的淋巴细胞均明显增加，CD4+/CD8+比例下降，患儿出现免疫功能紊乱。对这一结果进行分析：B淋巴细胞是EBV的主要潜伏细胞，病毒增殖时细胞表面可表达多种抗原，并经抗原提呈细胞提呈后激活CD8+淋巴细胞，引发细胞毒效应，杀伤受到感染的B淋巴细胞，导致CD4+淋巴细胞大量消耗，外周血中CD4+细胞数量下降，患儿出现CD4+/CD8+下降甚至倒置[8]。CD19+是B淋巴细胞的表面标记，本研究中，除T细胞亚群分布发生改变外，IM患儿的B淋巴细胞显著降低，尽管EBV不能直接作用于B淋巴细胞，但是可以通过IM急性期过度增殖的T细胞杀伤B细胞，导致B淋巴细胞免疫功能缺陷[9-10]。NK细胞在抗病毒免疫中发挥重要的作用，与对照组儿童相比，IM患儿NK细胞比例降低，但是经过治疗后患儿的NK细胞无明显上升，这一结果说明NK细胞在IM患儿病毒复制期的免疫作用有限。

荧光定量聚合酶链反应检测EBV-DNA是近年来发展的技术，可以定量反映体内的EBV-DNA水平，并准确反映EBV感染和病毒的复制情况。EBV-DNA的载量与器官损害程度及疾病种类、疾病的严重程度及病死率呈正相关，临床上可以根据EBV-DNA拷贝数大小来判断病情严重程度[11-12]。经过治疗后，患儿的EBV-DNA滴度明显下降，症状好转，67例患儿EBV-DNA转阴，但是13例患儿的EBV-DNA仍为阳性；EBV-DNA阴性患儿的CD4+/CD8+比例显著高于阳性患儿，EBV-DNA转阴后患儿免疫功能恢复。尽管EBV-DNA阳性患儿治疗后的T细胞亚群恢复水平不及阴性患儿，但仍较治疗前明显好转。其原因为本研究所有患儿均接受积极的抗病毒治疗，更昔洛韦是临床常用的广谱抗病毒药物，能够有效抑制病毒复制[13]。

对EBV-DNA未转阴的相关因素进行分析：干扰素使用、年龄及初始Ct与EBV-DNA转阴具有显著相关性。初始Ct值反映患儿体内病毒复制水平，与疾病严重程度相关；3岁以下患儿的免疫系统尚未发育完善，故恢复较慢；干扰素的抗病毒作用主要为广谱的病毒抑制作用，能够诱导细胞对感染病毒产生抗性，干扰细胞内病毒基因的转录及蛋白的翻译，从而限制或xg抑制病毒的复制；同时，干扰素对细胞免疫及体液免疫均具有调节作用，对巨噬细胞及NK细胞的免疫功能也有一定的增强作用[14-15]。上述结果说明，对于病情严重、低龄或免疫功能较低下的患儿，应该酌情应用干扰素。

综上所述，EBV感染可以引起IM患儿T细胞亚群的紊乱，临床上应采取积极的抗病毒治疗。

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InfluenceofEpstein-BarrvirusinfectiononTcellsubsetinchildrenwithinfectiousmononucleosis*

CuiQianghua1,SunLi1,WuLin1，FangPing2

(1.DepartmentofPediatrics,HanzhongMunicipalPeople′sHospital,Hanzhong,Shaanxi723000,China；2.DepartmentofRespirationMedicineSecondAffiliatedHospitalofXi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

ObjectiveTo observe the influence of Epstein-Barr virus(EBV) infection on T cell subsets in children with infectious mononucleosis(IM).MethodsEighty children patients with IM in the Hanzhong Municipal People′s Hospital from January 2013 to January 2016 were chosen as the study subjects and received the anti-virus therapy.The negative conversion rate of EBV-DNA after treatment was observed.The distributions of T cell subsets were compared between the children patients with EBV-DNA positive and patients with EBV-DNA negative.The related factors of EBV-DNA non-negative conversion were analyzed.ResultsAfter treatment,67 children cases (83.75%) were EBV-DNA negative conversion.The proportions of CD3+and CD8+after treatment in the EBV-DNA negative group were lower than those in the EBV-DNA positive group,and the proportion of CD4+and CD4+/CD8+were higher than those in the EBV DNA positive group,the difference had statistical significance (P<0.05).In the analysis on the related factors in the children patients with EBV DNA non-negative conversion,the gender,WBC count and lymphocyte count had no significant correlation with EBV-DNA negative conversion(P>0.05),while interferon use,age and initial Ct demonstrated significant correlation with EBV-DNA non-negative conversion(P<0.05).ConclusionEBV infection can lead to disturbance of T cell subsets in children with IM,so clinic should adopt an active anti-virus treatment.

herpesvirus 4,human；infectious mononucleosis;T cell subsets

R725

A

1671-8348(2017)25-3491-03

2016-12-13

2017-06-11)

国家自然科学基金资助项目(81000009)。

崔强华(1970-)，本科，副主任医师，主要从事儿童呼吸疾病方面的研究。