决明子蒽醌苷对两肾一夹高血压大鼠肾损伤的保护作用

2017-10-13陈建双王一帆李莎莎于海荣

中国老年学杂志 2017年19期

关键词：小动脉肾素蒽醌

陈建双王一帆李莎莎于海荣

(承德医学院，河北承德 067000)

决明子蒽醌苷对两肾一夹高血压大鼠肾损伤的保护作用

陈建双王一帆李莎莎于海荣

(承德医学院，河北承德 067000)

目的观察决明子蒽醌苷对两肾一夹高血压大鼠的降压及肾损伤保护作用。方法复制两肾一夹高血压大鼠模型，随机分为模型组、0.2、0.4 g/kg决明子蒽醌苷组及佐芬普利(0.01 g/kg)组。另取10只大鼠作为假手术组。各给药组大鼠灌胃给药8 w，每周末检测大鼠尾动脉收缩压。给药后第57天留取24 h尿液，放免法测定尿β2微球蛋白(MA)含量。颈椎脱臼处死大鼠，以大鼠肾小叶间动脉、入球小动脉中膜厚度与管腔直径比值、肾小球损伤率及尿β2-MA含量反映大鼠肾损伤程度。放免法检测肾组织内肾素、血管紧张素(Ang)Ⅱ及醛固酮含量。结果决明子蒽醌苷能明显降低两肾一夹高血压大鼠尾动脉收缩压(P<0.01或P<0.05)；决明子蒽醌苷组，小叶间动脉、入球小动脉中膜厚度与管腔直径比值、肾小球损伤率及尿β2-MA含量较模型组明显降低(P<0.01或P<0.05)；决明子蒽醌苷能明显减弱两肾一夹高血压大鼠肾组织内肾素、AngⅡ及醛固酮的表达(P<0.05)。0.4 g/kg决明子蒽醌苷与佐芬普利(0.01 g/kg)无明显差异(P>0.05)。结论决明子蒽醌苷对两肾一夹高血压大鼠有显著降压及肾损伤保护作用，该作用与其抑制肾素、AngⅡ及醛固酮表达有关。

决明子蒽醌苷；两肾一夹高血压；肾损伤；β2微球蛋白；肾素；血管紧张素Ⅱ；醛固酮

决明子为豆科植物决明或小决明的干燥成熟种子，味甘、苦、咸、性微寒，具有清肝明目、润肠通便等功效〔1〕。现代药理学研究证实决明子具有明显的降压、降脂、保肝、抗衰老及增强免疫功能等作用。决明子含蒽醌、萘并吡咯酮、脂肪酸、氨基酸和微量元素等多种成分。蒽醌苷是决明子主要功效成分之一，含量约占1%〔2〕。研究证明决明子蒽醌苷对丙酸睾丸酮所致高血压大鼠有明显的降压作用〔3〕。目前国内外并无决明子蒽醌苷对肾源性高血压降压及肾损伤保护作用的相关报道。本文采用乙醇提取法得到决明子蒽醌苷，观察其对两肾一夹高血压大鼠肾损伤的保护作用及机制。

1 资料与方法

1.1一般资料清洁级Wistar雄性大鼠12周龄，体重(200±20)g，购自天津山川红实验动物中心提供，合格证号SCXK(津)2010-001。

1.2仪器与药品 BP-6 无创伤血压测量系统(成都泰盟科技有限公司)；BL-420F生物功能实验系统(成都泰盟科技有限公司)；Olympus BX51生物显微镜(上海仪圆光学仪器厂)；石蜡两用切片机；哺乳动物手术器械一套；直径0.25 mm无菌针灸针。决明子(安国市昌达中药材饮片有限公司)；水合氯醛(武汉市和盛化工，批号1005412)；注射用青霉素钠(华北制药股份有限公司，批号 Y1001328)；佐芬普利(济南富创医药科技有限公司)；肾素、血管紧张素(Ang)Ⅱ、醛固酮及β2微球蛋白(MA)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(武汉博士德生物有限公司)。

1.3两肾一夹高血压大鼠模型复制及分组 Wistar大鼠80只，术前24 h禁食，自由饮水。以10%水合氯醛(3.5 ml/kg)腹腔注射麻醉，仰卧位固定，大鼠腹部脱毛，消毒皮肤，于剑突下1.5 cm处沿腹正中线切开，于左肾门处游离肾动脉，随机取10只作为假手术组，其余70只在肾动脉下穿入无菌丝线，把直径为0.25 mm的针灸针与肾动脉血管长轴紧贴平行放置，用无菌丝线结扎肾动脉和针灸针，然后抽出针灸针，造成单侧肾动脉狭窄〔4〕。术后3 d每日腹腔注射青霉素钠预防感染，并于术后24 h禁食不禁水，此后自由进食和饮水。术后第4周末测量大鼠尾动脉收缩压，达150 mmHg 以上者视为造模成功。将造模成功大鼠50只，随机分为模型组，蒽醌苷(0.2、0.4 g/kg)决明子蒽醌苷组及佐芬普利组(0.01 g/kg)，每组10只，各给药组大鼠1次/d连续灌胃给药8 w，给药容积为10 ml/kg体重，溶剂为生理盐水。模型组与假手术组给予等体积生理盐水。

1.4标本采集各组大鼠用药后第57天，留取24 h尿液，用于测定尿β2-MA；颈椎脱臼处死后摘取右肾，由肾被膜层向肾门冠状切开，将肾脏一分为二，取一半用4%甲醛溶液固定，常规脱水石蜡包埋，置成5 μm的连续切片，分别行HE和弹力纤维染色。另一半制成肾组织匀浆，测定肾素、AngⅡ及醛固酮含量。

1.5尾动脉压测量用药后每周末采用BP-6无创血压测量系统检测大鼠尾动脉收缩压。

1.6肾组织损伤病理学观察显微镜高倍镜下观察肾组织切片，利用十字标尺，测量小叶间动脉和入球小动脉中膜厚度和管腔直径，计算二者比值以反映肾内小动脉血管重塑程度。镜下计数病变肾小球(肾小球毛细血管塌陷、肾小球萎缩、硬化、坏死等)数目，计算全组织切片肾小球损伤率〔5〕。

1.7尿β2-MA、肾组织肾素、AngⅡ及醛固酮含量测定放免法检测尿β2-MA含量；将肾组织用0.9%生理盐水配成10%匀浆，低速离心(3 000 r/min)20 min，取上清液放免疫法测定肾素、AngⅡ及醛固酮含量，按试剂盒说明进行操作。

1.8统计学方法采用SPSS11.5统计学应用软件行单因素方差分析。

2 结果

2.1各组尾动脉收缩压比较模型组大鼠尾动脉收缩压较假手术组明显升高(P<0.01)，决明子蒽醌苷组大鼠血压明显低于模型组，自用药后第2周末差异显著(P<0.05或P<0.01)，0.4 g/kg决明子蒽醌苷组与佐芬普利组无明显差异(P<0.05)，见表1。

2.2各组肾损伤程度比较模型组大鼠肾组织切片小叶间动脉与入球小动脉中膜厚度与管腔直径比值、肾小球损伤率及尿β2-MA含量较假手术组明显增大(P<0.01)，决明子蒽醌苷组上述各指标较模型组明显减小(P<0.05或P<0.01)，0.4 g/kg决明子蒽醌苷组与佐芬普利组无明显差异(P<0.05)，见表2。

表1 各组尾动脉收缩压比较

与模型组比较:1)P<0.05，2)P<0.01;与佐芬普利组比较:3)P<0.05，4)P<0.01

表2 各组大鼠肾损伤程度、肾组织肾素、AngⅡ及醛固酮含量比较

2.3各组大鼠肾组织肾素、AngⅡ及醛固酮比较模型组大鼠肾组织肾素、AngⅡ及醛固酮含量较假手术组明显升高(P<0.01)，决明子蒽醌苷组上述指标较模型组明显减小(P<0.05或P<0.01)，0.4 g/kg决明子蒽醌苷组与佐芬普利组无明显差异(P<0.05)，见表2。

3 讨论

本实验中行大鼠左侧肾动脉缩窄术，造成单侧组织缺血，由于入球小动脉壁牵张感受器所受牵张刺激减弱及肾小球滤过率降低，流经致密斑的小管液中Na+减少均可刺激近球细胞肾素释放增多，激活体内的肾素-Ang-醛固酮系统。AngⅡ可使体内的微血管广泛收缩，外周阻力增加，导致大鼠血压升高；AngⅡ作用于肾上腺皮质，使其合成释放的醛固酮增多，醛固酮可促进远曲小管和集合管钠、水重吸收，机体循环血量增加，进一步促进血压的升高。AngⅡ和醛固酮还可导致血管内皮细胞促生长因子分泌异常，血管壁平滑肌细胞增生肥大，细胞外基质增多，血管壁增厚，管腔狭窄〔5，6〕，加重肾组织缺血，进一步促进体内肾素-Ang-醛固酮系统的过度激活，由此形成恶性循环过程。AngⅡ引起的出球小动脉收缩强于入球小动脉，肾小球滤过分数增大，高滤过，甚至血浆蛋白质的滤出，可造成肾小管的重吸收功能受损。尿β2-MA是反映高血压早期肾小管功能损伤非常敏感的指标之一〔7〕。本研究结果表明决明子蒽醌苷能明显延缓高血压肾损伤进程，具有一定的肾损伤保护作用，且该作用与其抑制大鼠体内AngⅡ及醛固酮表达有关。

1高艳青，刘俊.决明子的药理作用及其研究进展〔J〕.中国药业，2008；17(8)：63.

2刘斌，巩鸿霞，肖学凤，等.决明子化学成分及药理作用研究〔J〕.药物评价研究，2010；33(4)：312-5.

3李续娥，郭宝江，曾志.决明子蛋白质、低聚糖及蒽醌苷降压作用的实验研究〔J〕.中草药，2003；34(9)：842-5.

4戴勇，彭武建，徐卓佳.两肾一夹肾性高血压大鼠模型的改进〔J〕.实验动物科学与管理，2006；23(2)：60-2.

5韩萍，景丽，张建中，等.两肾一夹型高血压大鼠肾脏损伤及血管改变动态观察〔J〕.宁夏医科大学学报，2011；33(2)：115-7.

6王双，万载阳，唐朝克，等.两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素Ⅱ反应变化及其机制〔J〕.中国动脉硬化杂志，2003；11(6)：501-4.

7杨平，余宏伟，魏彤.卡维地洛对原发性高血压患者尿微量蛋白及尿β2微球蛋白的影响〔J〕.临床荟萃，2012;27(11)：987-9.

〔2016-04-13修回〕

(编辑苑云杰/曹梦园)

R541.4

1005-9202(2017)19-4752-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.026