林海标，黄小亭，张乔轩，韩丽乔，王建兵，柯培锋，黄宪章，庄俊华

(1.广东省中医院检验医学部，广州 510120；2.广州中医药大学第二临床医学院，广州 510120)

·质量管理研究·

国际参考实验室能力验证样品的均匀性评价*

林海标1，黄小亭2，张乔轩1，韩丽乔1，王建兵1，柯培锋1，黄宪章1，庄俊华1

(1.广东省中医院检验医学部，广州 510120；2.广州中医药大学第二临床医学院，广州 510120)

肌酸激酶；均匀性；参考实验室；能力验证

Keywords: creatine kinase; homogeneity; reference laboratory; coefficient of variation

参考实验室能力验证计划是保证各参考实验室测量结果准确性的重要途径。国际临床化学联合会(IFCC)每年通过发放参考实验室能力验证样品(RELA)评估各参考实验室测量能力[1-2]。为评价RELA样品的均匀性，本研究参照文件CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》[3]和CNAS-GL29《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》[4]要求，用Roche生化分析仪同时测量2014至2016年连续3年RELA样品的14个项目，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、总胆红素(T-Bil)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、葡萄糖(Glu)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)，探讨RELA样品的瓶间差异是否满足参考实验室的比对要求，也为同行均匀性评价试验提供参考。

1 材料与方法

1.1检测系统 Roche Modular P800生化分析仪及其配套试剂、C.fas校准品。

1.2样品测试方法验证 广东省中医院健康体检者新鲜血清样品；Bio Rad质控品level 2和level 3；2014、2015和2016年RELA-A、B，从样品总体中各随机抽取6个样品用于均匀性检验。需溶解的样品均在室温(20～22 ℃)下溶解并立即测量，通过实验室空调系统控制室温，用温湿度计实时监控室内温度。复溶前4 h将溶解用纯水等实验用品提前放入准备室，提前30 min将冻干品从冰箱取出，并用称量法溶解，严格控制溶解的标准化操作[5]。

1.3样品测量 在测量前首先对参加本次调查的生化分析仪日常维护保养，保证室内质控在控。然后按照实验室标准操作程序测定样品。每份样品重复测量2次，记录结果。样品测量顺序第1次为1、3、5、2、4、6，第2次为6、4、2、5、3、1。

2 实验与结果

2.1测量方法的评价 选择新鲜血清样品和BioRad质控品level 2、level 3，在Roche P800分析仪上按均匀性试验要求测量，每份样品重复测量2次，结果见表1。

表1 测量方法的评价结果

2.2RELA样品的检测 用Roche P800分析仪参照1.3要求测量2014至2016年3年RELA样品，结果见表2。AST项目RELA 2014A/B样品CV均>2.0%；CK项目除RELA 2016B样品CV<2.0%外，其他样品CV均大于2%。

表2 RELA样品检测结果

2.3RELA样品的均匀性评价 见表3、4。单因素方差分析结果显示，所有样品CK项目F>4.39，P<0.05，2015B样品ALT和T-Bil项目、2014A样品Cr项目统计结果F>临界值4.39，P<0.05。SS≤0.3σ准则分析结果显示，所有样品CK测量结果SS>0.3σ，其他项目测量数据均SS≤0.3σ。

表4 RELA样品SS≤0.3σ准则分析结果

3 讨论

参考实验室能力验证计划的目的是通过实验室间比对检测各实验室的测量能力[6]。在能力验证计划实施过程中，样品必须具有良好的均匀性、稳定性[7]。本研究用文件CNAS-GL03提供的2种均匀性统计方法评价样品均匀性：(1)单因素方差分析；(2)SS≤0.3σ准则。单因素方差分析是通过计算样品间均方MS1与样品内均方MS2的比值，在统计过程中，当F值小于临界值时，表示结果差异无统计学意义，表明样品均匀。然而，当测量数据样品内均方MS2非常小时，尽管样品间均方MS1很小，所计算出的F值仍然超过临界值，结果差异有统计学意义。为获得更客观的统计结果，通过对数据整体分析，对于CV很小，但单因素方差分析又显示有统计学差异的项目进一步用SS≤0.3σ准则分析。

本研究首先使用血清和Bio Rad质控样品评价仪器和分析测量方法性能，结果显示所有评价项目的变异系数(CV)均小于1.0%，说明本研究使用仪器和分析测量方法均能满足实验要求；在此基础上，我们对2014至2016年连续3年RELA样品参照文件CNAS-GL03和文件CNAS-GL29中均匀性评价要求进行测量，单因素方差分析结果表明，CK项目所有样品测量结果统计分析F值均大于临界值4.39，表明在α=0.05显著性水平时，2014至2016年RELA样品中CK的活性存在瓶间差异。2015年B样品ALT、T-Bil项目和2014年A样品Cr项目F值分别为6.48、6.21和5.86，均大于临界值4.39，但其样品内均方MS2仅为0.83、0.02、1.08，总CV仅为0.96%、0.72%和0.62%，这就出现上文提到的统计现象，我们进一步参考SS≤0.3σ准则进行分析，3组数据样品间不均匀性标准偏差SS值，ALT为1.51 U/L，T-Bil

为0.22 μmol/L，Cr为1.62 μmol/L；能力验证计划的能力评价标准偏差目标值σ，ALT为8.98 U/L，T-Bil为1.91 μmol/L，Cr为14.29 μmol/L，则0.3×σ，ALT为2.69 U/L、T-Bil为0.57 μmol/L、Cr为4.29 μmol/L，SS≤0.3σ，结果差异无统计学意义。因此，2014至2016年RELA样品中ALT、T-Bil、Cr项目均匀性良好。

综上，参考物质或室间质评物质在使用前应对所有测量项目评价均匀性；调查2014至2016年间各RELA样品CK项目存在不均匀性，其原因尚未得知。因此，其测量结果可能不能反映各参考实验室的真实能力，应引起室间质评机构的高度重视。

[1]陈文祥. 临床检验参考测量系统与临床检验分析质量保证[J].中华检验医学杂志,2007,30(4):478-480.

[2]夏昌宇, 徐国宾, 刘欧,等. 5种浓度水平冰冻混合人血清ALT、AST二级标准品的研制[J]. 临床检验杂志, 2011, 29(2):140-143.

[3]中国合格评定国家认可委员会. 能力验证样品均匀性和稳定性评价指南[S]. CNAS-GL03,2006.

[4]中国合格评定国家认可委员会. 标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法[S]. CNAS-GL29,2010.

[5]林素平, 韩霜, 臧素纲,等. 干粉校准品复溶方法及校准次数对生化测量系统校准的影响[J]. 临床检验杂志, 2014, 32(4):319-320.

[6]Yun Li, Jianbing Wang, Xianzhang Huang,etal. Matrix Effects in Proficiency Testing Materials Influence theAccurate Measurement of Gamma-Glutamyltransferase Activity[J]. Clin Lab， 2016,62:1941-1945.

[7]童清, 陈宝荣. 冰冻混合人血清酶校准品的赋值[J].临床检验杂志,2015,33(3):226-229.

Evaluationforhomogeneityofproficiencytestsamplesininternationalreferencelaboratory

LINHai-biao,HUANGXiao-ting,ZHANGQiao-xuan,HANLi-qiao,WANGJian-bing,KEPei-feng,HUANGXian-zhang,ZHUANGJun-hua

(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,GuangdongProvincialHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510120,Guangdong；2.TheSecondClinicalMedicalSchoolofGuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510210,Guangdong,China)

R446

A

2017-05-08)

(本文编辑王海燕)

国家自然科学基金面上项目(81572088)；广东省中医药局面上项目(20161081)。

林海标，1984年生，男，主管技师，大学本科，主要从事临床生化检验和标准化工作。

王建兵，主任技师，硕士研究生导师，E-mail：wangjianbing625@163.com。

10.13602/j.cnki.jcls.2017.09.14