刘志科，李村院，张秋雨，刘 洋，马亚茹，王月丽，陈创夫*

(1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2.石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832003；3.河南科技学院动物科技学院，河南新乡 453003)

鸡白痢沙门菌套式PCR检测方法的建立及初步应用

刘志科1△，李村院2△，张秋雨3，刘 洋1，马亚茹1，王月丽1，陈创夫1*

(1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2.石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832003；3.河南科技学院动物科技学院，河南新乡 453003)

为了建立一种快速、高效和简便的鸡白痢沙门菌套式PCR检测方法，根据沙门菌侵袭蛋白基因invA的高度保守区域，利用Primmer 5.0软件设计2对特异性的套式引物，以提取的沙门菌DNA为模板克隆invA基因，将其连入T载体并计算拷贝数作为套式PCR的模板，在对反应条件进行优化的基础上，建立最佳的套式PCR反应条件，确定其上、下游引物用量分别为0.3 μL，套式PCR的第1次退火温度为57.4℃，第2次为53.5℃。应用该方法对已构建好的不同浓度的标准阳性质粒作为模板进行检测，其灵敏度为102拷贝数/20 μL，远高于常规PCR的106拷贝数/20 μL。用建立的套式PCR方法对从新疆石河子某鸡场采集的25样品进行检测，与传统的诊断方法比较符合率达95.00%。建立的鸡白痢沙门菌套式PCR检测方法具有快速、可行、特异性强、准确率高等特点，为鸡沙门菌病的早期诊断和研究提供了技术支撑。

鸡白痢沙门菌；套式PCR；常规PCR；invA基因；灵敏性

沙门菌是一种寄生在人和多种动物肠道内的革兰阴性菌，是一种重要的人畜共患病病原。鸡白痢沙门菌病是一种急性败血性疾病，多危害20日龄以内的雏鸡，患病鸡表现为白痢、高病死率；……