洪毅，高莉，姜作玲

(上海医药集团青岛国风药业股份有限公司，山东 青岛 266000)

·中药工业·

养心氏滴丸纯化工艺研究

洪毅*，高莉，姜作玲

(上海医药集团青岛国风药业股份有限公司，山东 青岛 266000)

目的：研究养心氏滴丸的纯化工艺。方法：采用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷的含量，采用HPLC法测定葛根素的含量，采用大孔树脂吸附的方法对养心氏滴丸水提液进行纯化。结果：确定了养心氏滴丸的纯化工艺，即采用JD-1(WLD)型大孔吸附树脂，树脂用量与药材量的比例为1.5∶1，吸附流速为0.1 L·min-1·kg-1，洗脱剂为70%乙醇，洗脱剂用量为树脂用量的3倍。结论：确定了养心氏滴丸纯化工艺的可行性，获得了纯化工艺参数，为大规模生产提供实验依据。

养心氏滴丸；黄芪甲苷；葛根素；大孔吸附树脂

养心氏滴丸处方由黄芪、葛根、丹参、党参、淫羊藿、山楂、灵芝、地黄、当归、黄连、延胡索、人参、甘草十三味中药材组成，处方量共890 g。具有益气活血、化瘀止痛的功能，用于治疗冠心病、心绞痛。方中君药为黄芪，臣药为葛根，黄芪甲苷和葛根素分别为黄芪和葛根的主要有效成分之一。现代研究表明，黄芪甲苷和葛根素对心血管系统疾病具有明显的药理活性，其中黄芪甲苷具有改善心肌重构、改善心肌能量代谢、保护血管平滑肌细胞和内皮细胞、抑制氧自由基产生等作用[1]；葛根素具有增加心肌血流量、改善心肌供氧、降低血小板聚集及血液黏度、改善失常心律等作用[2]。

在前期研究中，我们针对君药的指标成分建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定黄芪甲苷含量[3]，针对臣药指标成分建立HPLC法测定葛根素含量。同时采用正交试验设计方法，以黄芪甲苷总量、葛根素总量和干膏率为考察指标，进行了养心氏滴丸提取工艺的研究[4]，确定了养心氏滴丸的最佳提取工艺。本次研究主要以大孔吸附树脂对养心氏滴丸水提液进行纯化，考察相关纯化工艺的相关参数，确定养心氏滴丸的纯化工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AT201电子天平(梅特勒)；Agilent 1200型高效液相色谱；Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器。

1.2 试药

养心氏滴丸处方所需中药购自青岛国风大药房，符合《中华人民共和国药典》2010版相关要求。

JD-1(WLD)型大孔吸附树脂(青岛腾祥)；黄芪甲苷对照品、葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为110882-200714，110580-201005)；乙睛、甲醇(德国默克，色谱纯)色谱用水为双蒸水；提取用水为自制纯水。

2 方法与结果

2.1 黄芪甲苷的HPLC-ELSD含量测定方法

方法学考察见参考文献[3]。

色谱条件：色谱柱为ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-水(32∶68)；柱温为30 ℃；流速为1.0 mL·min-1；ELSD检测器漂移管温度为105 ℃，气体(空气)流速为2.7 mL·min-1；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000。色谱图见图1。

注：A.黄芪甲苷对照品;B.样品中黄芪甲苷。图1 黄芪甲苷的HPLC图

2.2 葛根素的HPLC含量测定方法

方法学考察参见文献[4]。

色谱条件：色谱柱为ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(25∶75)；柱温为25 ℃；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为250 nm。理论板数按葛根素峰计算应不低于3000。色谱图见图2。

注：A.黄芪甲苷对照品;B.样品中黄芪甲苷。图1 黄芪甲苷的HPLC图

2.3 养心氏滴丸提取工艺

根据前期研究结果[4]确定养心氏滴丸水煎煮条件：加10倍量水，煎煮3次，每次1 h。

2.4 养心氏滴丸纯化工艺条件

大孔吸附树脂是一种人工合成的比表面积很大的高分子吸附剂，能在中药水提液中选择性吸附各种类型的有效成分，如生物碱、黄酮、苷类、蒽醌等，从而达到分离、纯化中药水提液有效部分，缩小中药剂量，提高药品质量的目的[5]。

2.4.1 树脂型号选择 根据经验和预实验，选择D101型、JD-1(WLD)型和HP20型树脂，主要根据最大上柱量确定最佳树脂型号。

称取处方量1/2的药材，按工艺要求煎煮3次，合并滤液，上柱液备用；分别将上述3种树脂装入6根玻璃柱(φ=10)，分别依次加入上柱液10、20、40、60、80、100 mL，静置30 min，放出过柱液，控制流速1～2 mL·min-1，收集过柱液。以黄芪甲苷和葛根素为目标成分，采用薄层色谱法跟踪目标成分的流出情况，结果如表1。

由表1可知，上述3种大孔吸附树脂对上柱液中目标成分均具有较好的吸附能力，吸附力大小依次为黄芪甲苷>葛根素。薄层色谱表明，葛根素均能被上述3种树脂最先检测出来，吸附力较弱，可采用薄层色谱法检测过柱液中有无葛根素，以此作为估测树脂最大上柱量和筛选最佳树脂型号的简捷方法。以葛根素为指标，最大上柱量大小排序：HP20>JD-1(WLD)>D101。

表1 3种树脂最大上柱量的定性检测结果

注：+为可见；±为隐约可见；-为未见。下同。

HP20树脂为进口树脂，吸附能力最大，但价格过于昂贵，用于实际生产成本过高；JD-1(WLD)树脂和D101树脂对黄芪甲苷和葛根素吸附均较好，D101稍差。从树脂柱最大上柱量、树脂安全性、树脂成本、预处理等方面综合考虑，本品选用JD-1(WLD)大孔吸附树脂分离纯化。

2.4.2 树脂饱和吸附率的测定 称取处方量1/2的药材，按工艺要求煎煮3次，滤过，合并滤液。滤液通过已处理好的内装20 g吸附树脂(湿态)的玻璃柱(φ=10)，吸附完毕，用水洗涤，再用70%乙醇洗脱，洗脱液置水浴上浓缩，称重，计算出树脂饱和吸附量为65 mg·g-1。

2.4.3 吸附树脂漏析吸附力的测定 按处方比例取药材48 g，按工艺要求煎煮3次，滤过，合并滤液。滤液通过已处理好的内装10 g吸附树脂(湿态)的玻璃柱(φ=10)，控制流速为1 mL·min-1，至流出液用试管反应检测刚好黄酮反应呈阳性时停止吸附，用水洗涤，再用70%乙醇洗脱，洗脱液置水浴上蒸干，称重，计算出树脂漏析吸附量为30 mg·g-1。

2.4.4 吸附流速的研究 按处方称取药材89 g，按工艺要求煎煮3次，合并滤液，并将滤液分为4等份，分别通过4根吸附柱(Φ=20，每根柱子均装50 g树脂)，控制流速分别为2、4、8、16 mL·min-1，并用盐酸镁粉反应检查废液中有无黄酮，结果如表2。

从表2看出，吸附流速需控制，才能保证吸附完全。按表2推算到工业生产，用Φ=360的吸附柱，内装100 kg树脂，10～20 L·min-1流速进行吸附，可保证吸附完全。

表2 吸附流速对吸附效果的影响

注：

2.4.5 树脂与药材比例关系的研究 按处方比例称取药材543 g，按工艺要求煎煮3次，滤过，合并滤液，并将滤液分为6等份(每份相当于89 g药材，即1/10处方量)，分别通过6根吸附柱(Φ=40，每根柱子分别装44.5、89、133.5、178、222.5、267 g树脂)，然后用5倍药材量的70%乙醇洗脱，将洗脱液浓缩、干燥。见表3、图3。

表3 树脂与药材比例关系的实验结果

图3 树脂与药材用量关系图

从上表看出，药材提取率及葛根素量随树脂用量增加而增加，但从生产实际考虑，一般选择药材量的1.5倍的树脂就能满足生产的要求，树脂用量过大，收率增加不多，而洗脱剂用量大增，在生产上是不经济的。

2.4.6 洗脱剂(乙醇)浓度的研究 称取药材89 g，按工艺要求煎煮3次，合并滤液，并将滤液分为3等份，分别通过3根吸附柱(Φ=20，每根柱子均装药材2倍量树脂)，然后分别用5倍药材量的50%、70%及90%乙醇洗脱，将洗脱液浓缩、干燥并测定其葛根素含量，结果见表4。

表4 洗脱剂浓度的比较

结果70%、90%乙醇的洗脱效果优于50%乙醇，70%与90%乙醇洗脱效果无差异，但大生产回收乙醇浓度均为70%左右，便于反复使用，故洗脱剂浓度选择70%乙醇。

2.4.7 洗脱剂(70%乙醇)用量的研究 按处方比例称取药材饮片50 g，按工艺要求煎煮3次，合并滤液，滤液通过树脂柱(Ф=20，树脂用量100 g)，吸附完毕用70%乙醇洗脱，当流出液颜色变深时开始分段收集洗脱液，每份收集1倍树脂量即100 mL，共收集10份，分别浓缩，干燥。结果见表5、图4。

表5 载药树脂柱70%乙醇洗脱分段收集表

图4 乙醇用量洗脱曲线

从表5可知，用70%乙醇作为洗脱剂，用量为吸附树脂量的3倍，可达到理想的洗脱效果。

2.4.8 纯化工艺技术参数小结 见表6。

表6 纯化工艺技术参数表

2.5 复方水提液吸附前后转移率的测定

选择测定复方水提液吸附前后黄芪、葛根的转移率，以进一步证明该纯化方使用的可行性。

按处方称取处方量1/10药材，水煎3次，合并3次滤液并等分成2份，其中一份置水浴上浓缩，真空干燥，得复方水煮液样品，另一份通过已处理好的树脂柱(φ=40)，吸附完毕后，用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，置水浴上浓缩，真空干燥，得复方洗脱液样品，将上述2个样品按制定的黄芪甲苷和葛根素含量测定方法进行测定，结果见表7～8。

表7 复方水煮液上柱前后黄芪甲苷的含量测定

表8 复方水煮液上柱前后葛根素的含量测定

结果表明，养心氏复方中黄芪甲苷转移率为90.01%，复方中葛根的转移率为98.12%，故采用大孔树脂吸附的养心氏滴丸纯化工艺从化学的角度(有效成分的定性、定量考察)是可行的。

3 讨论

养心氏滴丸作为大处方复方制剂，其水提液中成分复杂，王治平[6]在对“黄芪-葛根”药对有效物质研究中也显示，黄芪甲苷与葛根素溶出程度与其所在有效部位其他成分的溶出程度正相关。因此，采用黄芪甲苷与葛根素作为纯化工艺的考察指标，操作简便、准确性高，在一定程度上反映纯化过程中有效部位的富集和转移情况。

通过大孔吸附树脂进行水提液纯化，能够大幅降低干膏量的同时，保证有效成分90%以上的转移率，从而保证了养心氏滴丸在降低服用量的同时疗效稳定。

综上所述，本实验确定了养心氏滴丸纯化工艺技术参数，同时采用黄芪甲苷和葛根素作为考察指标，确定了纯化工艺的在化学角度的可行性，为进一步滴丸成型提供基础。为了保证药品的疗效，还需通过药理药效方面的进一步研究确定工艺的合理性。

[1] 李香华，王洪新.黄芪甲苷在心血管疾病中的作用[J].心血管病学进展，2011，32(1)：132-136.

[2] 徐蕴.葛根素对心血管疾病治疗作用的研究[J].时珍国医国药，2007，18(12)：3114-3115.

[3] 黄庆文，向兰，田红伟，等.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定养心氏滴丸中黄芪甲苷含量[J].内蒙古中医药，2009，28(16)：28-29.

[4] 姜作玲，洪毅，赵俊梅，等.养心氏滴丸提取工艺研究[J].世界中西医结合杂志，2015，10(2)：183-197.

[5] 刘彬果，郭文勇，钟蕾，等，大孔树脂吸附技术在中药制剂中的应用[J].解放军药学学报，2003，19(6)：452-455.

[6] 王治平.探讨“黄芪-葛根”药对配伍规律对药效物质的影响[D].广州：广州中医药大学，2011.

PurificationProcessofYangxinshiDrippingPills

HONGYi*，GAOLi，JIANGZuoling

(ShanghaiPharmaceuticalGrouptheQingdaoGrowfulMedicineCo.，Ltd，QingdaoShandong266000，China)

Objective：To study purification process of Yangxinshi Dripping Pills.Methods：Water extract of Yangxinshi Dripping Pills was purified by macroporous resin.Astragaloside IV was determined by HPLC-ELSD.Puerarin was determined by HPLC.Results：The optimal purification condition was determined，that is，macroporous adsorption JD-1(WLD)，the proportion of resin and medicinal materials 1.5∶1，adsorption velocity 0.1 L·min-1·kg-1，eluent of 70% ethanol，three times as many dosage of eluent for the dosage of resin.Conclusion：The optimized purification process has laid the foundation for Yangxinshi Dripping Pills production in large amounts.

Yangxinshi Dripping Pills；astragaloside IV；puerarin；macroporous resin

2016-05-03)

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洪毅，主管药师，研究方向：中药新药工艺研究及已上市品种二次开发；Tel:(0532)86058846，E-mail：hongyi2673@sohu.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.3.024