许丽丽

摘 要：目的：优化加巴喷丁有关物质检测方法。采用HPLC方法检测加巴喷丁，二酰胺（杂质1）、二酸（杂质2）、二氰（杂质3）、内酰胺（杂质4）、亚酰胺（杂质5）的含量。用汉邦VP-ODS柱；乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相，梯度洗脱；流速：0.85ml/min；λ：210nm；柱温：40℃；进样量：20ul。

关键词：加巴喷丁；含量；HPLC法

加巴喷丁是一种新颖抗癫痫药，它通过改变GABA代谢产生药理作用。中国药典[1]中加巴喷丁的质量标准，只控制一个内酰胺的含量，误差较大。本文根据USP29[2]建立了HPLC法测定加巴喷丁有关物质的方法，该法准确、分离度好，灵敏度高，可以很好的控制质量。

一、仪器与试剂

Agilent 1100型高效液相色谱仪；梅特勒十万分之一天平；乙腈和甲醇为美国TEDIA公司的色谱纯溶剂；磷酸二氢钾和氢氧化钾为上海凌峰化学试剂有限公司的分析纯试剂；去离子水为Millipore超纯水系统制备。

二、确定方法

比较了汉邦VP-ODS，Agilent ZORBAX SB-C18和依利特Hypersil ODS色谱柱，结果表明汉邦VP-ODS色谱柱，分离度高，峰型好。

色谱柱：汉邦VP-ODS（ 250mm×4.6mm，5μm）；λ：210nm；流速：1.3ml/min；柱温：40℃；进样量：20ul；稀释剂：1.2mg/ml磷酸二氢钾溶液，用5mol/L KOH溶液调PH至6.9；流动相A：940ml水溶解1.2g磷酸二氢钾，并用5mol/L KOH溶液调PH至6.9，加入60ml乙腈，混匀；流动相B： 700ml水溶解1.2g磷酸二氢钾，用5mol/L KOH调PH至6.9，加入300ml乙腈，混匀。梯度洗脱：0-7min流动相A为100%，7-45min内流动相A由100%匀速降到0，流动相B由0匀速升到100%，15.4-48min内流动相A保持0，流动相B 保持100%。

检测方法：分别精密称取加巴喷丁、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和杂质5对照品适量置于同一容量瓶中，用稀释剂稀释成含加巴喷丁、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和杂质5对照品浓度均为0.007 mg/ml，作为对照品溶液。精密称定350mg加巴喷丁，放入25ml容量瓶中，用稀释剂溶解至刻度，作为供试品溶液。

三、方法验证

（一）专属性试验 分离度≥1.5；理论塔板数≥3000。

分别配制加巴喷丁、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5对照品的單个溶液和混合溶液，照“2”项下色谱条件进样，出峰顺序为：加巴喷丁、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5。分离度分别为3.10、7.08、19.26、16.34、3.26；理论塔板数分别为14703、10389、4066、37067、204778、185973。

（二）定量限和检测限 定量限信噪比约在10：1，检测限信噪比约在3：1。

取专属性项下的单个溶液适量，用稀释剂逐步稀释至信噪比为3：1和10：1，加巴喷丁、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和杂质5的检测限（?g/ml）分别为0.677、0.00671、0.431l、0.00944、0.0577、0.0117；加巴喷丁、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和杂质5的定量限（?g/ml）分别为2.032、0.0201、1.293l、0.0283、0.173l、0.0350。

（三）线性关系 R≥0.995

分别精密称取加巴喷丁和各杂质对照品适量置于同一容量瓶中，用稀释剂稀释成含加巴喷丁和各杂质分别为0.014 mg/ml的溶液。分别精密量取上述溶液2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，置10ml的量瓶中，用稀释剂稀释至刻度。照“2”项下条件进样，记录谱图。加巴喷丁、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和杂质5有关物质测定线性范围考察的相关系数R分别为：0.9979、1、0.9997、0.9997、1、1。

（四）精密度试验 RSD%≤2.0%

分别取加巴喷丁和各杂质照品适量置于同一容量瓶中，用稀释剂配制成浓度均为0.007mg/ml的对照品溶液。取对照品溶液40?l连续进样6次，记录谱图，加巴喷丁、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和杂质5各自6针图谱峰的RSD（%）分别为：0.95、0.10、0.64、0.17、0.09、0.13。

（五）样品测试

标准[2]：加巴喷丁各杂质≤0.05%；其他单杂≤0.05%；总杂≤0.25%；小于0.03%的杂质可忽略不计。

照“2”项下的方法测定加巴喷丁三批样品的有关物质，结果201300701中检出（杂质4）0.01%，杂质1、杂质2、杂质3、杂质5、其他杂质均未检出，总杂质含量为0.01%；20130702中检出（杂质4）0.01%，其他杂质0.01%，杂质1、杂质2、杂质3、杂质5均未检出，总杂质含量为0.02%；20130703中检出（杂质4）0.01%，杂质1、杂质2、杂质3、杂质5、其他杂质均未检出，总杂质含量为0.01%。

四、总结

研究结果表明，本方法专属性、重现性、线性均良好，且加巴喷丁和各杂质的检测限都较小，能够较好的检出，该方法方便快捷，可以准确的测定加巴喷丁中有关物质的含量。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].中国医药科技出版社.2015.6.5

[2]美国药典委员会.美国药典[S].化学工业出版社.2013.6endprint