APP下载

超高效液相色谱法检测6种人参皂苷含量

2017-09-20孙磊

东方食疗与保健 2017年5期
关键词:醇类西洋参皂苷

孙磊

哈药集团世一堂饮片有限责任公司 150000

超高效液相色谱法检测6种人参皂苷含量

孙磊

哈药集团世一堂饮片有限责任公司 150000

目的:通过超声提取的方式,对药食同源植物中6种人参皂苷的含量进行检测。方法:提取剂为50%浓度的甲醇溶液,料液配比为1:80(g:ml),设置超声时间为30分钟,本次实验的流动相为0.05%的磷酸水以及乙腈,通过梯度洗脱的方式实现实验操作,检测的波长为203nm。结果:通过检测实验可以发现,当质量浓度保持在5~1000μg/mL的范围之中时,其线性较好,在对6种不同的人参皂苷含量进行检测时,发现最低检出限一般在22.5到51.0mg范围中,平均回收率最低为98.1%到105.5%,本实验中的三种样品的三醇类皂苷含量低于二醇类皂苷含量,三七中的Rgl含量最高,西洋参的Re含量最高。结论:实验结果表明,这种超高效液的相色谱法检测结果准确,灵敏度较好,适用于数量较多的产品检测。

超高效液相色谱;超声提取;皂苷含量

三七、西洋参以及人参都属于“药食同源”的人参属植物,这类植物中的功能成分一般是人参皂苷,属于一种特殊的化合物,主要是糖与苷元相连制成的化合物提取人参皂苷的方法有很多种,检测的方法也有很多种,为了提升人参皂苷的分离性能,本文对超高效液相色谱的检测方法进行研究,不仅检测结果比其他的检测方法更准确,检测速度也相对比较快,现有检测过程如下。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

实验材料:无水甲醇、无水乙醇和磷酸、乙腈、Milli Q超纯水、人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rd、人参、西洋参及三七。

仪器:Aglient1290超高效液相色谱仪、Aglient 1100高效液相色谱仪、Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μ m)、C18 色谱柱 (Phenomenex 4.6 mm×250 mm,5 μm)、BSA2245-CW 电子天平、KQ-600DA 型超声波清洗器

1.2 方法

样品粉碎,过 80 目筛。 准确称取(0.50±0.01)g样品,加入适量提取液,在一定条件下超声提取。将提取液定容,过 0.22 μm 有机滤膜,待液谱分析。UPLC 色谱条件:流动相为乙腈 (A)和 0.05%磷酸水(B),梯度洗脱程序:0~5 min,18%A;5~6min,18%~20%A;6~7 min,20%A;7~11 min,20%~30%A;11~15 min,30%A;15~18 min,30%~35%A。柱温 30 ℃,流速 0.35 m L/min,检测波长 203 nm,进样量 2 μL。HPLC 色谱条件 :流动相为乙腈 (A)和 0.05%磷酸水(B),梯度洗脱程序:0~5 min,20%A;5~25min,20% ~22% A;25 ~30 min,22% ~25% A;30 ~55min,25% ~50% A;55 ~57 min,50% A;57 ~60 min,50%~80%A。 柱温 30 ℃,流速 1.0 m L/min,检测波长 203 nm,进样体积20μL。采用 SPSS17.0 One-way(ANOWA)进行单因素方差分析(P<0.05),比较不同提取条件对人参皂苷含量的影响。

2 结果

2.1 超声提取单因素试验

研究提取溶剂、料液比、超声时间对提取物皂苷含量的影响,确定相关因素及其范围。

2.1.1 提取溶

利用甲醇、水、乙醇、50%甲醇 、60%甲醇、70%甲醇提取样品中人参皂苷, 种纯溶剂对皂苷提取效果有一定的差异。 用水提取到的总皂苷含量高于甲醇、乙醇,且水溶剂和甲醇溶剂差异不显著。 以纯水溶剂提取到的原人参三醇类皂苷含量高于二醇类,用甲醇溶剂相反。 由于三醇类皂苷在结构上较二醇类皂苷多1 个羟基, 极性略强与二醇类皂苷, 因此用纯水溶剂提取到的三醇类皂苷含量略高。 最终采用甲醇水溶液提取样品中的皂苷。用甲醇水溶液提取到的总皂苷含量基本相近,均显著优于纯溶剂提取的效果。4种比例的甲醇水溶液对原人参三醇皂苷的提取效果均优于纯水溶液, 对原人参二醇类皂苷的提取效果与纯甲醇溶剂基本相当。

2.1.2 超声时间

固定超声波清洗仪 功率 600W,频率 40k Hz 条件,比较不同超声时间对人参皂苷的提取效果。超声时间对原人参二醇类皂苷影响不大,对原人参三醇类有影响。从总皂苷含量看,超声10min 和 20 min 的提取率偏低,超声提取 30,40,50,60 min 的提取效果较好。最终选择提取时间30 min。

2.2 流动相对分离效果的影响

人参皂苷的检测波长为 203 nm。 选择乙腈为有机相,扣除溶剂的背景值。 水相中磷酸的含量对 6 种人参皂苷的分离影响较大 , 尤其是对 Rg1 和Re 分离度的影响。 纯水相中不能很好地将 Rg1 和Re 分离。 随着磷酸含量的增加 ,这两组分分离度增大,然而分析时间延长,组分的响应值降低。最终选择含磷酸 0.05%的水溶液为 A 相。

2.3 UPLC 与 HPLC 分离效果比较

采用 UPLC,18min 即 可分 离 6 种 皂苷 , 而 采用HPLC 需 要 50min 才能进行基线分离,节约近 2 倍的时间。UPLC的流速约为 HPLC 的 1/3,大大减少了流动相的使用。在分析人参皂苷时,使用 UPLC,其分离度与使用 HPLC 的相似,但进样量少,分析速度快,节省溶剂。

2.4 线性范围、准确度和精密度

将6种人参皂苷标准品配成质量浓度为 5,10,20,50,100,200,500,1 000 μg/m L 的混合标准溶液,以浓度(x)为横坐标、色谱峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线,进行回归分析。 以3倍信噪比计算方法的最低检出限。6种人参皂苷在质量浓 度5~1 000 μg/m L 范围内线性良好,相关系数均大于0.999,最低检出限在 22.5~51.0 mg/kg 之间。

2.5 加标回收率试验

选取有代表性的人参样品向其中加入 500,1 000,2 000 mg/kg 3 个水平的混标,做加标回收试验。平均回收率为 98.1%~105.5%,相对标准偏差为1.3%~3.3%。该方法准确,灵敏度高,重现性好,省时快捷,适合日常大批量样品的检测。

2.6 样品测定

对市售人参、西洋参、三七样品中 6 种人参皂苷含量进行测定人参中 6 种皂苷总含量比西洋参和三七低。 人参、西洋参和三七中人参皂苷含量差异很大。 对于原人参三醇类皂苷(Rg1、Re和 Rf),三七样品高于西洋参、人参,平均含量依次为 19 124.0,10 392.2,5 316.1 mg/kg, 并且西洋参和三七中不含 Rf。西洋参中 Re 含量最高,三七中Rg1 的含量最高。 对于原人参二醇类皂苷(Rb1、Rc和 Rd), 西洋参样品高于三七高于人参,平均含量依次为 28 368.1,24 785.3 和 9 760.1 mg/kg。 三类样品中原人参二醇类皂苷均高于三醇类皂苷。

3 讨论

苷元的种类不同,其合成的人参皂苷也存在差异,人参皂苷主要有三种不同的类型,分别是:齐墩果酸皂苷、二醇型皂苷以及三醇型皂苷。除了第一种人参皂苷之外的两种人参皂苷都可以作为活性成分,能够有效地调节人体的神经中枢系统、内分泌系统以及造血系统,不仅能起到抗疲劳的作用,还能发挥抗癌的作用。UPLC是一种比较常见的检测中药材的方式,本文对 HPLC与UPLC进行了比较,比较对象主要是分离性能,通过比较试验发现,在同样的实验条件之下,UPLC方法的实用性更强,不仅能够快速获取检测数据,其检测数据的准确性也比较高,再进行精密度实验、回收实验后,对人身、三七以及西洋参三种药品进行测定,确定在对数量比较多的批量药品检测时,可以使用这种方法,技术人员还要对这种方法进行改进,使其能够更好地检测人身皂苷。

[1] 许勇,诸艳蓉,王柯,季申. HPLC测定复方丹参胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量[J].中国实验方剂学杂志.2013(06)

[2] 吴和珍,李婷婷,李菁,朱艳平,杨艳芳. 高效液相色谱法测定益智宁颗粒中人参皂苷 Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量[J].湖北中医药大学学报.2012(02)

[3] 王一博,肖丹,李晓宇,戴雨霖,越皓,刘淑莹. 液相色谱-质谱联用技术结合多探针底物法研究人参皂苷 Rb1的体外代谢[J].高等学校化学学报.2015(10)

[4] 陈洪岩,姚晨旭,张小龙. 高效液相色谱四级杆飞行时间串联质谱法测定启脾丸中7种人参皂苷的含量[J].中国药师.2017(03)

R473.5

A

1672-5018(2017)05-213-01

猜你喜欢

醇类西洋参皂苷
固锈材料和低表面处理涂料及其制备方法及涂料工艺
文登西洋参“红”了!
“参”得人心的文登西洋参
连云港市化工园区VOCs排放情况调查研究
人教版高中化学必修与选修之间进阶关系分析
HPLC-MS/MS法同时测定三七花总皂苷中2种成分
西洋参的前世 今生
HPLC法测定大鼠皮肤中三七皂苷R1和人参皂苷Rb1
HPLC法同时测定熟三七散中13种皂苷
中型车辆用醇类-汽油机的性能及排放分析