吴 悦 吴人照 龙华晴 马津真 聂晓静 陈 宇 戴关海 陈 璇 童晔玲 任泽明

1 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053 2 浙江省中医药研究院 浙江 杭州 310007

实验研究

养胃舒与叶酸片治疗亚硝基胍诱发慢性萎缩性胃炎模型大鼠的萎缩逆转作用观察*

吴 悦1吴人照2#龙华晴1马津真1聂晓静1陈 宇2戴关海2陈 璇2童晔玲2任泽明2

1 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053 2 浙江省中医药研究院 浙江 杭州 310007

目的：探讨养胃舒、叶酸片治疗亚硝基胍（MNNG）诱发慢性萎缩性胃炎（CAG）模型大鼠的体重恢复及胃黏膜萎缩逆转作用。方法：Wistar大鼠自由饮用167μg/ml蒸馏水浓度的饮用液，实验造模12周。确定成模后，将大鼠分为模型组、养胃舒组、叶酸片组，另设同龄正常对照组。并分别给予药物干预后，观察大鼠体重、胃组织病理组织学情况。结果：①体重：治疗第8周,养胃舒组体重丢失恢复显著高于模型组（P＜0.05）,叶酸片组体重丢失有恢复趋势，但无显著性（P＞0.05）。②病理：养胃舒组肠化显著减轻（P＜0.05），叶酸片组胃黏膜炎症等级、腺体萎缩、不典型增生均显著减轻（P＜0.05，P＜0.01）。模型组雄1发生肿瘤，各治疗组未见肿瘤。结论：养胃舒对CAG模型大鼠在减轻体重丢失，减轻肠化方面有较好治疗作用；叶酸片对CAG模型大鼠在胃黏膜炎症等级、腺体萎缩、不典型增生方面有较好的治疗作用。

慢性萎缩性胃炎 养胃舒 叶酸 病理 大鼠

阻断乃至逆转胃黏膜萎缩和肠化生的发展进程，对慢性萎缩性胃炎（CAG）治疗至关重要。中西药联合治疗CAG有着一定的优势，养胃舒与叶酸片均为临床可选药物，但未见系统的比较研究文献。本研究采用亚硝基胍（MNNG）诱发大鼠CAG模型，客观评价养胃舒与叶酸片对CAG的治疗效果，观察各组大鼠体重丢失恢复情况和病理改变情况。

1 材料与方法

1.1 实验动物：正常Wistar大鼠70只，雌雄各半，体重160～190g，动物合格证编号：0228546。均购买于上海斯莱克实验动物有限公司，其实验动物生产许可证号为：SCXK(沪)2013-0016。实验动物均饲养于本院25±2℃的屏障实验室内，每12小时光照明暗交替，实验动物使用许可证号：SYXK(浙)20090122。

1.2 实验药物：①养胃舒颗粒：颗粒剂，每袋10g，内含党参、陈皮、黄精、山药、玄参、乌梅、山楂、北沙参、干姜、菟丝子、白术（炒）等。由合肥神鹿双鹤药业有限公司生产，临床人体用药量20g/日。批号：1506215，有效期3年。②叶酸片：依据《中国慢性胃炎共识意见》，叶酸可以改善CAG，预防胃癌［1］，本实验采用了CAG以及胃癌前病变相对比较公认有一定疗效的西药叶酸片，每片5mg。批号：1603007，有效期3年。

1.3 实验仪器：RM2235 LEICA病理切片机、EG1150C LEICA生物组织冷冻机、EG1150H LEICA生物组织包埋机、ASP200 LEICA生物组织自动脱水机：德国莱卡公司；BX41OLYMPUS显微镜：日本OLYMPUS（オリンパス）株式会社；Nikon ECLIPSE Ti显微摄像系统：日本Nikon株式会社。

1.4 实验试剂：MNNG：5g/瓶，上海蓝季生物公司购买，由日本东京化成工业株式会社生产，批号：75F71-TF；甲醛溶液：500ml/瓶，上海凌峰化学试剂有限公司，批号：20130610。

1.5 MNNG诱发的CAG模型大鼠造模方法：6周龄的Wistar大鼠：70只，雌雄各半，50只开始造模：在饮水中加入MNNG。每周1次用蒸馏水配成1g/L浓度的储存液，避光冷藏保存。同时配成167μg/ml蒸馏水浓度的饮用液，将其装入外用黑色塑料袋包裹着的水瓶，让大鼠自由饮用。本次实验造模12周。

1.6 MNNG诱发CAG模型大鼠的治疗：造模完成时，随机选取4只模型动物与4只正常动物胃组织做病理组织学检查，确定成模后，按照实验的分组要求（每组12只，雌雄各半）分组并开始给药。模型组给生理盐水，养胃舒颗粒给养胃舒颗粒4.0g/kg/日灌胃，叶酸组给叶酸片5.0mg/kg/日灌胃，此外，取12只相同条件的大鼠作为空白（未造模）对照组。在给药第8周完成时，4组大鼠均麻醉，迅速将胃摘出，福尔马林固定，石蜡包埋，做4μm切片，用HE、AB染色，进行组织学检查。

1.7 病理组织学检查方法：标本：大鼠均麻醉，迅速将胃摘出，标本为全胃，上段留0.5cm食管，下段留1.5cm十二指肠；沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，浸于10%中性福尔马林中。取材范围：从前胃一直到十二指肠纵向全长、全层。包埋切片：石蜡包埋，作4μm切片。染色：HE染色、AB染色。光镜观察：①胃黏膜炎症情况：采用半定量法。后在胃组织的胃窦部取10个视野，具体参照在1994年美国休斯顿所提出的胃炎诊断标准。②胃黏膜腺体厚度：每张胃组织切片中，选取胃窦部黏膜5个视野，测出在每个视野下胃窦黏膜腺体厚度，得出每张切片5个视野平均值(μm)。③胃腺体数目：选取100倍镜下，找到每只大鼠胃组织的幽门环0.2～1.2mm（200～1200μm）之间（即1mm范围）胃窦固有的腺体总个数，单位通常以“个/mm”来表示。④不典型增生：在每张切片中，取5个高倍镜视野，观察胃黏膜上皮细胞，明确有无细胞核多形性和腺体不典型增生的变化（采用轻、中、重级别报告）。⑤主细胞、壁细胞数目：选取400倍镜下，取5个视野平均值。⑥肠上皮化生表现：参照《中药新药治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究指导原则》及2006中国上海慢性胃炎共识意见。

1.8 统计学方法：采用SPSS17.0统计软件进行统计，所有数据以均数±标准差（±s）表示，多组均数比较采用F检验，其中两组比较计量资料采用LSD-t和Dunnett T3检验，计数资料采用χ2检验。P＜0.05为差异显著。

2 实验结果

2.1 体重：治疗前模型大鼠体重较正常大鼠显著下降（P＜0.01）。造模完成后，在治疗前各治疗组间体重情况无显著差异（P＞0.05），具有可比性。各治疗组治疗后体重较模型组体重丢失有一定程度恢复。治疗第8周时养胃舒组大鼠体重丢失较模型组有显著恢复（P＜0.05），叶酸片组大鼠体重丢失较模型组有恢复趋势，但无显著性（P＞0.05）。养胃舒与叶酸片体重丢失恢复比较无显著性（P＞0.05）。见表1、图1。

2.2 病理：养胃舒组肠化（“++”“+++”只数）5/11（45.45%）（治疗8周后养胃舒组存活11只），与模型组肠化（“++”“+++”只数）10/12（83.33%）比较，有显著差异（P＜0.05）。养胃舒组炎症、腺体数量、腺体厚度、主细胞、壁细胞、轻度不典型增生与模型组比较，有改善但无显著性（P＞0.05）。叶酸片组炎症、腺体数量、腺体厚度、轻度不典型增生与模型组比较，有显著差异（P＜0.01，P＜0.05）,肠化方面有改善，但无显著性（P＞0.05）。模型组还有1只动物（雄1号）发生肿瘤，为十二指肠浆膜面胃腺癌，其他各治疗组未发生肿瘤。在炎症方面，叶酸片比养胃舒显著改善（P＜0.05）。详见表2、表3。

结合表1的体重丢失恢复疗效，以及模型组还有1只动物发生肿瘤，进行综合分析，养胃舒对MNNG诱发的CAG模型大鼠体重丢失、肠化有显著改善作用。在一定程度上有改善炎症等级、胃黏膜萎缩、不典型增生的疗效。叶酸片对MNNG诱发的CAG模型大鼠体重丢失有恢复趋势，能显著改善胃黏膜炎症等级、萎缩、不典型增生的病变情况。在炎症（等级）方面，叶酸片比养胃舒显著改善。养胃舒与叶酸片治疗CAG的疗效表现在不同方面，但对CAG的治疗都有较好效果。

表1 养胃舒与叶酸片对MNNG诱发的CAG模型大鼠治疗8周体重影响（±s,g/只）

表1 养胃舒与叶酸片对MNNG诱发的CAG模型大鼠治疗8周体重影响（±s,g/只）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

分组养胃舒组(n=12、11)叶酸片组(n=12)正常组(n=12)模型组(n=12)治疗第8周226.18±37.24*206.17±28.46 292.83±61.88**171.08±32.23治疗前170.33±33.17 168.75±29.74 259.42±51.93**167.77±38.23

图1 养胃舒、叶酸片对MNNG诱发的CAG模型大鼠治疗8周大鼠体重（g/只）

表2 养胃舒与叶酸片对MNNG诱发的CAG模型大鼠治疗8周胃组织不典型增生、肠化观察（只）

表3 养胃舒与叶酸片对MNNG诱发的CAG模型大鼠治疗8周胃组织萎缩病理观察（±s）

表3 养胃舒与叶酸片对MNNG诱发的CAG模型大鼠治疗8周胃组织萎缩病理观察（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与叶酸组比较，#P＜0.05。

组别养胃舒组叶酸片组正常组模型组壁细胞(个/视野) 178.02± 44.76 156.07± 52.27 285.00±113.21**184.42±102.81例数11 12 12 12炎症 (等级) 0.77±0.28#0.50±0.28**0.23±0.20**0.88±0.38腺体数量(个/mm) 38.55±5.45 39.83±6.95*45.83±7.16**33.67±4.58腺体厚度(um) 240.41±37.7 262.53±64.42*254.91±38.97*212.02±41.83主细胞(个/视野) 200.23±139.8 185.23±117.76 319.42±121.35*205.75±118.12

3 讨论

CAG是一种常见的消化系统疾病，且已明确为癌前疾病。中医学将其归属为“胃脘痛”“嘈杂”“胃痞”等范畴。CAG的病因，现代医学认识尚不十分明确。目前多认为CAG的发生是多病因综合作用、漫长、多阶段、多基因变异的积累过程，主要有Hp感染、胃黏膜微循环改变、黏膜营养因子缺乏、胆汁反流、精神压力、心理异常等。其主要病机是中焦湿热，瘀血内阻。治宜益气活血、温养脾胃为主。

养胃舒颗粒内含党参、陈皮、黄精、山药、玄参、乌梅、山楂、北沙参、干姜、菟丝子、白术（炒）等。党参有益气健脾之功，陈皮有理气开胃、燥湿化痰之功，北沙参、玄参有养阴清肺、益胃生津之功，黄精、山药、白术（炒）有补气健脾、滋肾润肺之功，菟丝子有滋补肝肾之功，乌梅、山楂、砂仁有消食健胃、温补脾阳、活血行气、收敛止痢之功，干姜有温中散寒、燥湿消痰、温肺化饮之功。现代药理研究已经证实，党参有提高机体免疫力，通过扩张末梢血管达到改善胃黏膜微循环的作用，还有利于促进蛋白质合成，有促使胃黏膜细胞、腺体细胞修复和再生的功能［2］；白术不仅具有提高机体免疫力、对抗肿瘤细胞毒性的作用，还具有双向调整胃肠运动，抗胃黏膜损伤，改善局部病变的综合作用［3］。北沙参的提取物能够抑制脂质的过氧化作用，也可以抑制促癌物质渗入磷脂中，有抑制肿瘤生成的作用［4］。以上药物综合运用，具有提高机体免疫、改善消化功能、调节胃肠道动力、抗胃黏膜损伤等作用。已有研究证实养胃舒可以有效改善胃黏膜损伤，促进胃黏膜修复和再生［5］。

叶酸片对细胞维持正常功能和增殖至关重要。近年来，越来越多的研究表明叶酸具有抗肿瘤作用，能够抑制肿瘤细胞中癌基因的表达［6］。有研究者发现胃腺癌患者的手术标本中，组织叶酸水平明显降低。当叶酸在一定浓度范围时，对胃癌细胞表现出良好的抑制作用［7］。在消化系统疾病中，叶酸代谢紊乱的状况同样存在，高纬等［8］观察叶酸片干预CAG患者后结果显示，叶酸片的供甲基作用在一定程度上对于CAG的恶变有预防作用。

关于养胃舒颗粒与叶酸治疗萎缩性胃炎进行作用特点比较的实验研究，未见文献报告。基于此，本实验选用单用养胃舒、叶酸片分别治疗CAG，观察CAG大鼠体重丢失恢复及胃组织病理情况。研究结果显示：从本实验研究结果看，养胃舒组对MNNG诱发的CAG模型大鼠治疗8周具有显著减轻体重丢失，显著改善肠化的作用，对胃黏膜炎症（等级）、萎缩情况有一定程度改善作用。叶酸片对MNNG诱发的CAG模型大鼠治疗8周具有显著改善胃黏膜炎症（等级）、萎缩、不典型增生作用，在一定程度上有减轻体重丢失趋势和改善肠化作用。总而言之，养胃舒、叶酸片治疗CAG的疗效表现在不同方面，但对CAG的治疗都有一定效果。

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2017-05-18

国家科技重大专项重大新药创制项目铁皮枫斗颗粒治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究，编号：2016ZX09101069；浙江省自然科学基金项目铁皮枫斗颗粒有效成分治疗慢性萎缩性胃炎的分子机理实验研究，编号：LY15H280011；浙江省重大科技专项项目铁皮枫斗颗粒治疗慢性萎缩性胃炎的研究——扩大适应症研究，编号：2009C13032

# 通讯作者：吴人照，E-mail：wufeng03@126.com