刘志敏，刘素巧，周淑艳，申艳梅，谷惠芳

(河北省石家庄市第二医院病理科，河北 石家庄 050017)

子宫腺肌病内膜-肌层界面MMP-7的表达及其与痛经、贫血的关系

刘志敏，刘素巧，周淑艳，申艳梅，谷惠芳

(河北省石家庄市第二医院病理科，河北 石家庄 050017)

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-7在子宫腺肌病患者内膜-肌层界面(EMI)的表达及其与患者痛经、贫血的关系。方法 采用免疫组织化学方法对60例子宫腺肌病(实验组)和60例对照组患者的EMI及深肌层分别进行MMP-7组织标记，并对其与患者痛经、贫血的关系进行分析。结果 实验组EMI处MMP-7的表达显著高于对照组，差异有统计学意义(χ2值分别为8.798、8.518，均P<0.05)；实验组MMP-7的表达强度在增殖期和分泌期均高于深肌层，差异均有统计学意义(χ2值分别为8.410、9.552，均P<0.05)。在子宫腺肌病患者EMI处MMP-7的高表达与患者痛经及贫血均存在正相关关系(r值分别为0.319、0.271，均P<0.05)。结论 MMP-7在子宫内膜-肌层界面参与了子宫腺肌病的发生和发展，并与痛经的发生、贫血密切相关。

腺肌病；子宫内膜-肌层界面；基质金属蛋白酶-7；痛经；贫血

子宫腺肌症是妇科常见病、多发病，一般认为是由多种机制、多种因素共同作用的结果，临床上多采取保守的对症处理，但效果并不理想，其病理表现为子宫内膜及其间质过度增生并向肌间浸润、增殖的一种良性疾病。有研究认为子宫内膜-肌层界面(endometrial-myometrial interface，EMI)的自我损伤与自我修复与子宫腺肌病的发生密切相关[1]。基质金属蛋白酶家族在腺肌病的发生发展中发挥着重要作用，现对基质金属蛋白酶(matrix metallaproteinases，MMP)-7在子宫内膜-肌层界面的表达进行检测，并分析其与痛经、贫血的相关性，探讨基质金属蛋白酶在腺肌病患者痛经及贫血中的可能机制。

1资料与方法

1.1一般资料

收集河北省石家庄市第二医院2011年5月至2015年10月因子宫腺肌病而进行全子宫切除手术患者的子宫内膜(包含部分肌层)60例作实验组，另选同期60例因子宫肌瘤、子宫脱垂等原因行全子宫切除患者的子宫内膜(包含部分肌层)作对照组，两组入选标本均包括增殖期30例、分泌期30例。标本来源均为育龄期妇女，且术后均经病理证实。排除血液系统疾病、肝肾疾病、甲状腺疾病、有宫内节育器、子宫腺肌病合并肌瘤者，以及非腺肌病原因引起的痛经合并贫血患者。实验组平均年龄为32.40±3.81岁、对照组为30.92±2.86岁。

1.2方法

1.2.1取材

全子宫切除手术标本，分别于子宫EMI和深肌层进行取材，要求子宫EMI包括基底层内膜及其邻近肌层，子宫腺肌病患者深肌层处标本应包含异位病灶。标本于10%中性福尔马林中固定、常规制片，观察其组织学形态，筛查入组。

1.2.2免疫组织化学检测及结果判断

用莱卡切片机(2135)切片，采用免疫组化链霉素-亲和素-生物素-酶复合物(strept avidin-biotin complex，SABC)法，实验步骤按试剂盒说明书进行。每组均以已知阳性片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)代替一抗作阴性对照。全面观察，随机抽取5个具有代表意义的高倍视野，根据阳性细胞百分率及显色深浅分级。兔抗人MMP-7多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2.3痛经及出血量评价标准

应用语言评价量表，进行患者的主诉疼痛分级；测定患者血红蛋白含量了解患者是否贫血。

1.3统计学方法

应用SPSS 19.0统计软件进行配对资料的方差分析、χ2检验及相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 MMP-7在子宫内膜-肌层界面和深肌层的表达

MMP-7一般多在腺细胞细胞质中呈阳性表达。实验组EMI处MMP-7的表达在增生期和分泌期均明显高于对照组，差异有统计学意义(χ2值分别为8.798、8.518，均P<0.05)。MMP-7在实验组EMI处的表达：增殖期MMP-7的表达强度高于深肌层，差异有统计学意义(χ2=8.410，P<0.05)；分泌期MMP-7的表达亦高于深肌层，差异有统计学意义(χ2=9.552，P<0.05)，见表1、图1。

表1 MMP-7在EMI和深肌层腺上皮的表达(n)

注：*与本组同一期深肌层比较P<0.05；#与对照组比较P<0.05。

EMI

深肌层

2.2 MMP-7的表达与痛经的相关性

在子宫腺肌病患者EMI处MMP-7的表达与痛经的发生存在相关性(r=0.319，P=0.013)；在深肌层MMP-7的表达与痛经的发生关系不明显(r=0.172，P=0.188)，见表2。

表2 实验组MMP-7的表达与痛经的关系(n)

注：*与无痛经比较，P<0.05。

2.3 MMP-7的表达与贫血的相关性

在子宫腺肌病患者EMI处MMP-7的表达与贫血的发生存在相关性：随着MMP-7水平的增高，血红蛋白含量下降，贫血程度增加，呈正相关关系，有统计学意义(r=0.271，P=0.036)。深肌层异位灶中MMP-7的表达与患者贫血关系不明显(r=0.149，P=0.255),见表3。

表3 实验组MMP-7的表达与贫血的关系(n)

注：*与无贫血比较，P<0.05。

3讨论

基质金属蛋白酶是一类蛋白水解酶，MMP-7是蛋白酶家族中相对分子量最小的一种特异性酶，主要降解Ⅳ型、Ⅶ型胶原，糖蛋白，纤维素和钙黏素等，是降解构成细胞外基质和基底膜的主要结构蛋白的主要酶系，在细胞的侵袭转移中发挥重要作用。

3.1 MMP-7在子宫内膜-肌层界面的表达

子宫EMI由基底层内膜和浅肌层组成，没有黏膜下层的屏障作用，腺体及其间质与平滑肌直接相连，有研究认为基底层内陷的内膜腺体具有更高的侵袭性[2]。本研究发现MMP-7在实验组EMI处的表达，增殖期和分泌期MMP-7的表达强度均高于深肌层，差异有统计学意义，提示MMP-7在组织中表达明显升高，降解大部分细胞外间质，改建宫腔内环境，内膜腺体的侵袭性增强。MMP-7是Wnt信号通路核内转录因子(transcription factors，TCF)的下游靶基因，它的激活对肿瘤细胞的失控性增殖具有促进作用。同时MMP-7还可能诱导肿瘤细胞发生凋亡耐受，使其逃避免疫监视而抑制其凋亡，使肿瘤细胞长期存活，加速肿瘤的生长、侵袭和转移[3]。实验组EMI处MMP-7高表达，提示MMP-7可能发挥了在恶性肿瘤中相同或者相似的作用机制，促使内膜异位种植、增殖的同时凋亡减弱，导致腺肌病表现出与肿瘤相似的生物学行为。在实验组EMI处MMP-7的表达在增生期和分泌期均明显高于对照组，推测可能是MMP-7降解基底膜和细胞外基质的作用增强，为本就具有增殖活性的基底层内膜腺体进一步侵犯浅肌层形成异位灶提供了便利条件。

3.2 MMP-7在子宫内膜—肌层界面的表达与痛经的关系

实验组EMI处MMP-7的表达与痛经的发生存在相关性，推测MMP-7活性增强，降解大量细胞外基质、诱导炎症反应；启动其下游的基质金属蛋白酶家族其他成员，形成链索反应；无菌性的炎性过程中产生的各种细胞因子、激素、生长因子等引发患者的疼痛。

腺肌病是一个雌激素依赖性疾病，也有研究发现雌激素能够促进环氧化酶-2的分泌[4]，环氧化酶-2能促进既是重要的炎症介质又是重要的致痛因子的前列腺素E2的增加，引起疼痛；尤其是当多次宫腔损伤与修复的情况下，持续存在炎性反应，局部致痛因子浓度增加，加剧了痛经。MMP-7可以降解几乎所有的细胞外间质，基底层内膜腺体侵袭性和增殖活性增强，促使腺肌病患者子宫浅肌层平滑肌间形成大小不一、形状各异、不规律分布的异位灶，浅肌层质地不均，致使月经期平滑肌的不平衡收缩，血液循环不畅，局部酸性代谢产物堆积，刺激神经末梢，也会促使患者疼痛程度升级。

3.3 MMP-7在子宫内膜-肌层界面的表达与贫血的关系

子宫EMI作为腺肌病发生的起始部位，构成了宫腔主要内环境。有研究通过超声发现子宫的蠕动活性起源于子宫内膜-肌层结合带，而深肌层处于安静状态[5]。在月经期，主要表现为宫底向宫颈方向的蠕动波，此时蠕动波的幅度达到最大，以利于经血的排出[6]。本研究中发现MMP-7的高表达，大量内膜间质结构被降解，加剧了子宫宫腔内环境的不稳定性，基底层内膜腺体增殖活性增强，侵入浅肌层，形成异位灶。浅肌层中夹杂大量的子宫内膜及其间质，组织结构的不均质促使蠕动波频率、强弱不等，平滑肌收缩不协调，影响子宫螺旋动脉的收缩，减缓了内膜的坏死脱落，血管开放时间长，加大出血量，延长月经期。MMP-7的高表达与贫血发生关系密切，有研究认为MMP-7在体外以剂量依赖的方式加速在人脐静脉内皮细胞的增殖[6]；还参与了血管内皮细胞的选择性扩展活动[7]，促进新生血管形成，增加月经期开放血管数量及表面积，月经量增加，加剧贫血，具有正相关关系。

3.4小结

总之，正常情况下人体内存在金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMPs)维持平衡状态，使EMI破坏和修复保持动态平衡。当平衡被打破，基质金属蛋白酶高表达，活性明显增强，基底层和细胞间基质被降解，加之损伤后的子宫内膜细胞能够以阿米巴样运动的形式蠕动和扩散，并发生转移，使子宫内膜获得浸润生长的能力[8]。MMP-7在实验组呈高表达，并与患者的痛经、贫血有正相关关系，有力地证实并丰富了“在位内膜决定论”，也提示宫腔内微环境，尤其是子宫EMI对于腺肌病的发生机制有重要意义。

MMP-7在腺肌病的发生发展及与临床患者痛经、贫血等关系紧密，从目前的研究中可知MMPs是一个复杂的大家族，各成员之间相互协调与制约，因此针对MMP-7与其他MMPs成员的差异，进一步探索MMP-7的作用及其表达的调控机制，对于研制高选择性的TIMPs，减轻患者痛苦具有重要意义。

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[专业责任编辑：张冠军]

Expression of MMP-7 in endometrial-myometrial interface of adenomyosis and its correlation with dysmenorrhea and anemia

LIU Zhi-min, LIU Su-qiao, ZHOU Shu-yan, SHEN Yan-mei, GU Hui-fang

(DepartmentofPathology,TheSecondHospitalofShijiazhuang,HebeiShijiazhuang050017,China)

Objective To investigate the expression of matrix metalloproteinase (MMP)-7 in endometrial-myometrial interface (EMI) of adenomyosis and its correlation with dysmenorrhea and anemia. Methods Immunohistochemistry SP method was adopted to determine the expression of MMP-7 in EMI and deep myometrium of 60 cases of adenomyosis (adenomyosis group) and 60 cases of control subjects, and the relationship between it and the pathogenesis of dysmenorrhea and anemia was analyzed. Results The expression level of MMP-7 in EMI was significantly higher in adenomyosis group than in control group (χ2value was 8.798 and 8.518, respectively, bothP<0.05). In adenomyosis group the intensity of MMP-7 was also higher in EMI than in deep myometrium both in proliferative phase and secretory phase (P<0.05), and the differences were statistically significant (χ2value was 8.410 and 9.552, respectively, bothP<0.05). Dysmenorrhea and anemia were positively correlated with the high expression of MMP-7 in EMI of cases of adenomyosis (rvalue was 0.319 and 0.271, respectively, bothP<0.05). Conclusion MMP-7 in EMI might participate the pathogenesis of adenomyosis, and it is closely correlated with dysmenorrhea and anemia.

adenomyosis; endometrial-myometrial interface (EMI); matrix metalloproteinase (MMP)-7; dysmenorrhea; anemia

2017-01-01

河北省科技厅科技支撑计划项目(编号：122777106)

刘志敏(1979—)，女，副主任医师，硕士研究生，主要从事腺肌病的基础与临床研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.08.013

R711.7

A

1673-5293(2017)08-0929-03