杨丙烨，付丹，胡方平，蔡学清



西瓜细菌性果斑病菌鞭毛基因的功能分析

杨丙烨，付丹，胡方平，蔡学清

（福建农林大学植物保护学院，福州350002）

【目的】西瓜细菌性果斑病由西瓜噬酸菌(,) 引起，是一种严重的世界性病害。细菌的鞭毛通常被认为是细菌的运动器官，在细菌的侵染过程中也起重要作用，已有报道表明这种作用可受鞭毛蛋白基因的调控，目前西瓜细菌性果斑病菌鞭毛蛋白基因的功能及其调控机理尚不清楚，本研究旨在探讨该基因在鞭毛形成和致病性等生物学特性中的作用。【方法】以果斑病菌野生型致病菌株1号基因组DNA为模板，设计一系列引物，PCR扩增敲除基因的上下游片段，通过回收、酶切、连接、转化等步骤构建敲除载体和互补载体，然后采用三亲杂交法，根据同源重组的原理，构建基因缺失突变菌株及其互补菌株，并对其鞭毛的形态特征、致病性、过敏反应、游动性、群体感应、菌膜、生长速率、菌落形态等生物学特性进行测定；进一步提取细菌总RNA，以谷氨酰胺合成酶基因为参照来校正目标基因的表达量，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法，比较野生菌株、敲除菌株和互补菌株部分鞭毛蛋白基因、、、、、和的表达量差异。【结果】通过抗性基因的筛选和PCR验证，成功构建了果斑病菌鞭毛蛋白基因缺失突变菌株1-fliS及其互补菌株1-fliShb，并对所得菌株的生物学特性和鞭毛进行观察，结果表明，与野生菌株相比，鞭毛蛋白基因缺失突变菌株的游动性、菌膜形成能力减弱，互补后游动性、菌膜形成能力基本恢复；……