潘琪，刘旭旭，彭浩然，蒲运丹，张永至，叶思涵，吴根土，青玲，孙现超



番茄的克隆及表达分析

潘琪，刘旭旭，彭浩然，蒲运丹，张永至，叶思涵，吴根土，青玲，孙现超

（西南大学植物保护学院，重庆400716）

【目的】克隆获得番茄（，），分析其基因序列生物信息学特征和预测蛋白的结构特征，明确SYTA亚细胞定位和组织表达，并分析其在绿色荧光蛋白（green fluorescence protein, GFP）标记的烟草花叶病毒（，TMV）侵染下的表达变化及其对TMV移动的影响，为明确SYTA在植物病毒侵染致病过程中的作用提供理论依据。【方法】根据番茄基因组含有的同源基因序列，利用Primer Premier 5.0软件设计克隆引物，采用RT-PCR技术克隆全长序列；应用生物信息学方法分析该基因的序列特征；使用MEGA 7.0对SYTA蛋白序列及其同源序列进行多序列比对，并构建同源物种间系统进化树；通过与GFP蛋白融合进行亚细胞定位；利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测番茄各部位的表达量以及在TMV胁迫的番茄中的表达变化；构建植物瞬时表达载体pCV-SYTA-mGFP，通过农杆菌介导在本氏烟草中瞬时表达，TMV-GFP攻毒，利用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测在本氏烟中瞬时表达SYTA时TMV-GFP的积累和移动情况。【结果】克隆得到1 620 bp的基因开放阅读框全长，序列比对及生物信息学分析表明，其编码的氨基酸序列具有家族的典型特征，含有N端的跨膜区、胞间连接区和C端的两个C2结构域；多序列对比及系统进化树分析发现，与茄科林生烟草、绒毛状烟草等植物亲缘关系较近，与黄瓜较远；亚细胞定位显示SYTA定位于细胞质膜。在番茄的根、茎和叶中的表达量从高到低依次为根＞叶＞茎；……