代 勇，代 岩

（1.抚顺市农业技术推广中心，辽宁 抚顺 113006；2.铁岭万和生物科技有限公司，辽宁 铁岭 112000）

蛹虫草菌丝液体培养条件研究

代 勇1，代 岩2

（1.抚顺市农业技术推广中心，辽宁 抚顺 113006；2.铁岭万和生物科技有限公司，辽宁 铁岭 112000）

本试验对蛹虫草菌丝培养条件进行了研究，确定最佳的培养条件是：pH值7.0，振荡培养时间7天，培养温度22℃，培养基装液量100毫升/瓶，摇床振频120～140转/分钟。菌丝体表现为菌球分布均匀，密度疏密适中，大小适宜，菌球组织紧实，干重可达到0.5克/100毫升。

蛹虫草；液体发酵；菌丝干重

蛹虫草是真菌和虫体相互结合的一种药用真菌，多寄生在鳞翅目蛹和幼虫体内。经研究，其营养价值和药用价值可和冬虫夏草相媲美，甚至有些成分还高于冬虫夏草。但由于冬虫夏草产量低，价格昂贵，所以蛹虫草的人工栽培显得尤为重要，且极具商业价值。经大量研究表明，人工液体发酵获得的虫草菌丝体和冬虫夏草的成分基本一致，可代替其入药。

1 材料和方法

1.1 材料

蛹虫草固体菌种，由辽东学院实验中心微生物与遗传实验室提供。主要仪器：高压蒸汽灭菌锅，恒温培养箱，远红外恒温干燥箱，分析天平等。菌种活化培养基：马铃薯200克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，磷酸二氢钾2克，硫胺素10毫克，琼脂20克，水1000毫升。液体发酵培养基:葡萄糖20克，蛋白胨10克，硫酸镁1克，磷酸二氢钾2克，硫胺素15毫克，核黄素15毫克，水1000毫升。

1.2 方法

菌种活化，将斜面固体菌种接种在活化平板培养基上，20～22℃培养1周，菌丝长满平板后即可转色备用。按液体发酵培养基配方制备液体培养基，用1摩尔/升Hcl或1摩尔/升NaOH将培养基pH值分别调制4.0、5.0、6.0、7.0、8.0。液体培养基分装在250毫升三角瓶内，每瓶100毫升，各处理重复5次，常规灭菌。在无菌条件下，用打孔器取活化菌种接种到液体发酵培养基内。培养条件: 20～22℃，闭光，130转/分钟振荡培养。振荡培养7天后过滤菌液，菌丝用蒸馏水冲洗数次，60℃烘干称重。不同培养时间对蛹虫草菌丝生长量的影响，培养时间分别为5、6、7、8、9天。不同培养温度对蛹虫草菌丝生长量的影响，培养温度分别为18、20、22、24、26℃。不同装液量对蛹虫草菌丝生长量的影响，在250毫升三角瓶中培养基装液量分别为80、100、120、140、160毫升。不同振频对蛹虫草菌丝生长量的影响，摇床振频分别为80、100、120、140、160转/分钟。

2 结果分析

2.1 不同pH值对蛹虫草菌丝生长量的影响

试验结果表明：不同pH值对蛹虫草菌丝生长量的影响不同。由表1可知，在其他条件相同的情况下，菌丝生长起始期其生长量随着pH值的升高而增加，当pH值为7.0时菌丝干重最大（0.4407克/100毫升），菌球分布均匀，大小适中，密度最佳。达到8.0时菌丝生长量开始下降，菌球密度也明显减小。说明菌丝在弱酸条件下随着pH值升高而升高，而碱性条件对菌丝生长有抑制作用。

2.2 不同培养时间对蛹虫草菌丝生长量的影响

菌丝在接种后2天内要经过适应期，接着会进入快速生长期，由表2可看出培养7天的菌丝干重最高（0.5483克/100毫升），在5～6天之间培养时间较短，菌丝快速生长期还未达到顶峰阶段，因此菌丝生长量较少，而8～9天菌丝培养时间过长，开始逐渐衰老自溶，菌球变大变松，产量下降。因此，多种因素综合考虑以培养7天最有利于菌丝的生长。

表1 不同pH值对蛹虫草菌丝生长量的影响

表2 不同培养时间对蛹虫草菌丝生长量的影响

表3 不同培养温度对蛹虫草菌丝生长量的影响

表4 不同装液量对蛹虫草菌丝生长量的影响

2.3 不同培养温度对蛹虫草菌丝生长量的影响

蛹虫草菌丝在15～30℃下均能生长，但温度的高低对菌丝的产量起着决定性作用。由表3可看出在22℃时，菌丝干重最高。在18～22℃之间菌丝生长量随着温度的升高而增加,当温度达到26℃时，由于温度过高不适宜菌丝生长，所以菌丝产量较低。

2.4 不同装液量对蛹虫草菌丝生长量的影响

培养基装液量的多少直接影响振荡培养的效果，不同液体体积在规定空间（250毫升）内的振荡效果差异较大，另外，较多的装液量也会给摇床增加负担。由表4看出菌丝生长量随着装液量的增加而减少，两者呈反比。分析原因，装液量少时有足够的剩余空间为培养基提供溶氧，利于菌丝生长。装液量在100毫升时菌丝干重最大（0.4414克/100毫升），装液量在120毫升时菌丝生长量与100毫升时差别不明显，但考虑到经济问题认为100毫升为最佳。

2.5 不同振频对蛹虫草菌丝生长量的影响

试验结果表明：在相同时间内，振荡频率越大菌丝生长量越多，在120～140转/分钟之间时菌丝生长量最高，菌球也较为均匀，浓密，但当振荡频率到达160转/分钟时菌丝体结球状不好，出现块状菌丝聚集象限，不利于生长，因此，综合考虑以120～140转/分钟最为适合。

表5 不同振频对蛹虫草菌丝生长量的影响

3 结论

对实验结果分析来看，蛹虫草菌丝发酵始期阶段在弱酸条件下生长较好，pH值在7.0时菌丝生长量达到最高峰，超过7.0时菌丝生长量减少，菌丝产量减低；菌丝培养的最佳时间为7天，在第7天时测得菌丝干重最高，说明菌丝以完成对数生长期，产量达到顶峰，如果继续培养，菌丝将进入衰老阶段，生长量不再增加；温度因素实验分析表明，在各处理之间菌丝产量没有差异，菌丝在18～26℃之间均能正常生长，但在22℃时菌丝产量最高；蛹虫草菌丝最佳的装液量为100毫升/瓶，实验结果显示，当装液量在100毫升时瓶内的溶氧量最高，对菌丝生长提供充足的氧分，菌丝生长量最高，菌丝质量最好；在不同振频对蛹虫草菌丝生长量的影响试验中，分析得摇床振荡频率在80～140转/分钟范围内菌丝产量逐渐增加，在140转/分钟时菌丝产量最高。