刘 凯， 田 立， 刘晓婷， 庞敬涛， 宋蒙蒙， 吕盼盼

尿AD7c-NTP表达水平对阿尔茨海默病早期诊断和病情评估价值的探讨

刘 凯1， 田 立2， 刘晓婷2， 庞敬涛2， 宋蒙蒙1， 吕盼盼1

目的 探讨阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(AD7c-NTP)表达水平的变化在阿尔茨海默病(AD)早期诊断和病情评估中的意义。 方法 选取AD组58例(轻度AD组26例、中重度AD组32例)，轻度认知功能障碍患者(MCI组)52例和对照组62例，采用酶联免疫吸附法(ELLSA)测定各组患者尿AD7c-NTP值，通过MMSE量表评定并行统计学分析。结果 不同受试组尿AD7c-NTP表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)，其中AD组和MCI组尿AD7c-NTP水平均高于对照组，AD组高于MCI组，中重度AD组高于轻度AD组。经Spearman秩相关分析，轻度AD组、中重度AD组、MCI组尿AD7c-NTP表达水平与MMSE评分呈负相关，与病程呈正相关。ROC曲线所显示的曲线下面积为0.952(95%CI：0.913～0.992，P=0.000)，当尿AD7c-NTP最佳临界值为1.76 ng/ml时，诊断AD的灵敏度和特异度分别是93.1%和90.3%。结论 尿AD7c-NTP的表达水平对于AD的早期诊断和病情评估具有重要的参考价值。

阿尔茨海默病； 轻度认知功能障碍； 尿AD7c-NTP； 神经心理学量表

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)作为最常见的痴呆类型，是引起神经系统退变的最主要原因[1]。轻度认知功能障碍(Mild cognitive impairment,MCI)被公认为AD的前期阶段，即有认知障碍却未达到痴呆程度，但已存在AD特异性病理改变[2]。目前，AD诊断中最具特异性的生物标记物是脑脊液β-淀粉样蛋白类(Aβ42)和tau蛋白(总tau蛋白和磷酸化tau蛋白)[3]，其标本获取有创、患者接受程度低，因而临床应用受到限制。阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(Alzheimer associated neuronal thread protein，AD7c- NTP)作为一种新的AD生物学标志物，在AD的早期诊断和干预中具有重要意义[4]。本研究通过对实验对象尿AD7c-NTP表达水平进行测定，并结合神经心理学量表，探讨其在AD及MCI中的临床诊断价值，以期为AD早期诊断和病情评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究资料 选取2015年3月-2017年3月期间就诊于潍坊市中医院脑病科门诊及病房的患者110例，年龄60～90岁，其中AD组患者58例，男29例，女29例，平均病程(18.43±8.11)个月；AD组根据CDR评分分为轻度、中重度两组，其中轻度AD组26例，中重度AD组32例。MCI组患者52例，男33例，女19例，平均病程(9.96±5.76)个月。选取同时期我院体检的同年龄段认知功能正常的老年人62例作为对照组。

1.2 诊断标准

1.2.1 AD诊断标准 符合美国国立神经病学语言障碍卒中研究所及阿尔茨海默病及相关疾病协会(NINCDS-ADRDA)制定的“很可能”诊断标准[5]。

1.2.2 AD程度分组标准 根据CDR评分将AD患者分为轻度AD(CDR评分=1分)、中重度AD(CDR评分≥2分)两组。

1.2.3 MCI诊断标准 符合美国Mayo神经病学研究中心的Petersen诊断标准[6]。

1.2.4 排除标准 (1)排除因药物、外源性物质、头部外伤、系统性疾病、中枢神经系统疾病等导致的认知功能进行性减退者；(2)排除抑郁状态和精神障碍者。

1.3 方法

1.3.1 一般资料 收集受试者均接受全面临床检查，包括详实的病史采集、神经系统专科查体、头部CT或MRI检查等；由课题组中接受过量表培训的人员进行神经心理学量表测试，包括简易智能状态量表(MMSE)、临床痴呆评定量表(CDR)、Hachinski缺血指数(HIS)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、日常生活能力量表(ADL)。

1.3.2 尿AD7c-NTP采集及测定 所有纳入实验对象留取中段晨尿，剔除浑浊及存在尿液分析异常的标本，将合格样本立即置于专用试管并于2 ℃～8 ℃恒温冰箱中保存(存放时间≤1 w)，采用AD7c-NTP检测试剂盒(深圳市安群生物工程有限公司生产，许可证编号：粤食药监械20010230)，严格按照说明书进行操作。

2 结 果

2.1 总AD组、MCI组和对照组尿AD7c-NTP表达水平的比较 AD组和MCI组尿AD7c-NTP水平分别为(2.34±0.50)ng/ml和(1.84±0.26)ng/ml，均高于对照组(1.33±0.38)ng/ml，3组受试者尿AD7c-NTP水平有显著性差异(F=97.67，P=0.00)，且总AD组与MCI组，总AD组与对照组，MCI组与对照组比较均有显著差异(P=0.00<0.05)(见表1)。

2.2 轻度AD组与中重度AD组尿AD7c-NTP表达水平的比较 中重度AD组尿AD7c-NTP水平为(2.58±0.35)ng/ml，高于轻度AD组(2.05±0.35)ng/ml，两组受试者尿AD7c-NTP水平有显著差异(t=-4.69，P=0.00<0.05)(见表2)。

2.3 轻度AD组、中重度AD组和MCI组尿AD7c-NTP表达水平与各因素的相关性分析 为进一步明确尿AD7c-NTP的水平与各因素的相关性，将轻度AD组、中重度AD组和MCI组尿AD7c-NTP与年龄、文化程度、MMSE评分及病程进行Spearman秩相关分析，得出结果：3组受试者尿AD7c-NTP水平与年龄无相关性(P>0.05)；尿AD7c-NTP水平与MMSE评分呈负相关，与疾病病程呈正相关，且都具有统计学意义(P<0.05)(见表3)。

表1 总AD组、MCI组和对照组尿AD7c-NTP表达水平的比较

与对照组比较*P<0.05；与MCI组比较#P<0.05

表2 轻度AD组与中重度AD组尿AD7c-NTP表达水平的比较

与轻度AD组比较*P<0.05

表3 轻度AD组、中重度AD组和MCI组尿AD7c-NTP表达水平与各因素的相关性分析

2.4 尿 AD7c-NTP表达水平的变化对AD的预测意义 取灵敏度作为纵坐标，1-特异度为横坐标，以此绘制ROC曲线，本次研究ROC曲线所显示的曲线下面积为0.952(95%CI：0.913～0.992，P=0.000)，当尿AD7c-NTP最佳临界值为1.76 ng/ml时，诊断AD的灵敏度和特异度分别是93.1%和90.3%(见图1)。

图1 尿AD7c-NTP表达水平诊断AD的ROC曲线

3 讨 论

AD7c-NTP作为神经丝蛋白属的成员，是由Munzar等[7]在1997年首次从脑组织中分离提取到的，是一种分子量仅为41 kD的跨膜磷蛋白，在AD患者的脑组织、脑脊液中选择性的表达，其含量与痴呆的严重程度成正比[8]。Ghanbari等[9]以及尹黎英[10]、孙红侠等[11]研究证明，AD7c-NTP在AD患者尿中的含量与脑组织及脑脊液中的含量均显著升高，具有明显相关性，对AD诊断的特异性和灵敏度高达90%，其在脑脊液和尿液中含量的变化与AD的病情严重程度呈正相关[12]。

本研究中总AD组尿AD7c- NTP表达水平为(2.34±0.50)ng/ml，较对照组(1.33±0.38)ng/ml明显升高，具有统计学意义(P<0.05)，提示尿AD7c-NTP的检测对AD的诊断具有重要的意义。MCI组尿AD7c-NTP表达水平为(1.84±0.26)ng/ml，高于对照组(1.33±0.38)ng/ml，低于总AD组(2.34±0.50)ng/ml，两两比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，表明尿AD7c-NTP的表达水平可能是MCI的生物学标志物指标之一。中重度AD组尿AD7c-NTP表达水平为(2.58±0.48)ng/ml，较轻度AD组(2.05±0.35)ng/ml明显升高，且具有统计学意义(P<0.05)，提示AD7c-NTP表达水平的高低在一定程度上能反映认知障碍的程度。

绘制ROC曲线，在以1.76 ng/ml为诊断界点时，尿AD7c- NTP诊断AD的敏感度为93.1%，特异性为90.3%，表明尿AD7c-NTP的表达对AD的诊断有着较高的敏感度和特异性。将尿AD7c-NTP测定值定为1.76 ng/ml可作为AD诊断的指标之一，可以提高临床诊断率。

经Spearman秩相关分析，轻度AD组、中重度AD组及MCI组尿AD7c-NTP表达水平与疾病病程均呈正相关，且具有统计学意义(P<0.05)，说明尿AD7c-NTP的表达水平随着病情的进展不断升高，对于AD患者的病情评估也有一定的参考价值，这与闫鹏[13]、Goodman[14]等研究报道结果相一致。

综上，采用以尿液为标本，ELLSA为测定方法的AD7c-NTP检测，具有快速便捷、可操作性强、无侵入性、性价比及特异性高等优点，为AD的早期诊断和病情评估提供了重要的生物学标记物检测手段。但目前，关于AD7c-NTP在AD发病过程中产生表达的具体机制研究尚不透彻，尿AD7c-NTP检测价值尚缺乏大样本多中心数据支持，有待进一步研究。

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Objective to investigate the value of urinary AD7c-NTP expression in the early diagnosis and disease evaluation of Alzheimer’s disease

LIU Kai,TIAN Li,LIU Xiaoting,et al.

(Clinical Medical College of Weifang Medical University,Weifang 261042,China)

Objective Objective to investigate the value of urine AD7c-NTP expression in early diagnosis and evaluation of Alzheimer’s disease.Methods Select 58 cases of Alzheimer’s disease (group AD) (mild AD group of 26 cases,moderate to severe AD group of 32 cases),mild cognitive impairment (MCI group) of 52 cases,and control group of 62 cases,Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay (ELLSA) was used to detect the expression of unrine AD7c-NTP,scoring by MMSE scale and collecting and analyzing the urine AD7c-NTP expression level.Results The results showed that there was a obvious statistical significance (P<0.05) in the expression level of urine AD7c-NTP among the different test groups.Besides,the expression level of urine AD7c-NTP of AD group and the MCI group were all exceeding the control group.The urine AD7c-NTP level of AD group was higher than that of MCI group,the urine AD7c-NTP level of moderate and severe AD group was higher than that of mild AD group.Analyzed by the spearman rank correlation,the group of mild AD group,the moderate-severe AD group and MCI group had a negative correlation with the level of MMSE,and a positive correlation with the course of the disease.Area under the ROC curve was 0.952 (95%CI:0.913～0.992,P=0.000),when the optimum critical value get 1.76 ng/ml,sensitivity and specificity for diagnosing AD was 93.1% and 90.3%.Conclusion The expression level of AD7c-NTP in urine has an important reference value for the early diagnosis and assessment of Alzheimer’s disease.

Alzheimer’s disease; Mild cognitive impairment; Urine AD7c-NTP; Neuropsychology

2017-04-04；

2017-05-29

潍坊市软科学研究计划项目(No.2016RKX035)

(1.潍坊医学院临床医学院，山东 潍坊 261042；2.山东省潍坊市中医院脑病二科，山东 潍坊 261041)

田 立，E-mail：wftianli@126.com

1003-2754(2017)08-0684-03

R749.1

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