王宇++潘燕妮++梁道斌++江渊++黄芩

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.16.032

[摘要] 目的 对结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）在艾滋病合并肺结核感染诊断中的价值分析。 方法 整群选择2014年1月—2016年7月间，广西玉林市红十字会医院收治并诊断为艾滋病疑似合并肺结核患者206例作为研究对象，最终确诊结核患者76例和非结核患者130例。对两组展开T-SPOT.TB检测，同时行结核抗体（Tb-Ab）检查。结果 结核感染组患者T-SPOT.TB阳性率为84.21%，明显高于非结核感染组16.15%（P<0.05）；艾滋病合并肺结核患者T-SPOT.TB检测灵敏度84.21%高于结核抗体36.84%，对比差异有统计学意义（P<0.05）；特异度两种方法分别为83.84%、85.38%，差异无统计学意义（P>0.05）。结核感染组CD4+T淋巴细胞计数≥200 cell/μL及CD4+T淋巴细胞计数<200 cell/μL患者T-SPOT.TB检测阳性率分别为93.75%、76.56%，差异无统计学意义；T-SPOT.TB检测阳性结果，A孔/B孔特异性斑点>100的结核诊断率高于A孔/B孔特异性斑点<100的患者（P<0.05）。 结论 T-SPOT.TB技术对艾滋病合并结核感染进行诊断的准确性、敏感性均较高。

[关键词] 结核感染T细胞斑点试验；艾滋病；结核感染

[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）06（a）-0032-03

Clinical Application Value of T-SPOT.TB in the Diagnosis of AIDS and Tuberculosis

WANG Yu， PAN Yan-ni， LIANG Dao-bin， JIANG Yuan， HUANG qin

Department of Infection， Yulin Red Cross Hospital， Yulin， Guangxi， 537000 China

[Abstract] Objective To analyze the value of T-SPOT.TB in the diagnosis of AIDS and tuberculosis. Methods 206 cases of patients suspected with AIDS and tuberculosis in our hospital from January 2014 to July 2016 were selected and 76 cases were diagnosed with tuberculosis and 130 cases were not the tuberculosis patients， and both groups were given T-SPOT.TB test and Tb-Ab examination. Results The T-SPOT.TB positive rate in the tuberculosis group was obviously higher than that of non-tuberculosis group， （84.21% vs 36.84%）， and the difference was statistically significant（P<0.05）， and the difference in the specificity between the two groups was not statistically significant， （83.84% vs 85.38%），（P>0.05）， and the T-SPOT.TB positive rate in patients whose CD4+T lymphocyte count ≥200 cell/μL and CD4+T lymphocyte count <200 cell/μL was respectively 93.75% and 76.56%， and the difference was not statistically significant， and the diagnosis rate of patients whose A hole/B hole specific spot>100 was higher than that of patients whose A hole/B hole specific spot <100（P<0.05）. Conclusion The accuracy and sensitivity of T-SPOT.TB in the diagnosis of AIDS and tuberculosis are high.

[Key words] T.SPOT-TB test； AIDS； Tuberculosis infection

近幾年，随着检测技术的不断发展和日渐成熟，结核感染T细胞斑点实验在结核感染诊断中逐渐被广泛应用[1]。这项新技术的问世与应用，使得艾滋病合并结核感染的诊断效果得到明显改善。该研究对2014年1月—2016年7月间该院收治的艾滋病合并肺结核感染患者76例和非合并结核感染患者130例展开了T-SPOT.TB检测，并对检测结果进行了统计分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究资料来源于整群选取该院在2014年1月—2016年7月这段时间内收治的，获得明确诊断的艾滋病患者，并疑似肺结核感染，共计206例作为研究对象。经检查确诊肺结核患者76例，非结核患者130例，将其分成两组：结核感染组和非结核感染组。结核感染组中，患者年龄区间为25～78岁，中位年龄为48岁，平均年龄为（45.9±12.3）岁，包括有男性57例，女性19例；非结核感染组中，患者年龄区间为20～75岁，中位年龄为45岁，平均年龄为（42.7±14.6）岁，包括有男性92例，女性38例。两组患者的年龄、性别等指标比较，差异无统计学意义（P>0.05），存在可比性，所有肺结核患者均符合临床诊断标准[2]，自愿接受临床检查，并签署了知情同意书。

1.2 方法

T-SPOT.TB检测试剂盒由金域公司提供，英国牛津原装进口试剂，获得资质的专业技术人员检测。方法：使用肝素抗凝管收集住院患者清晨空腹外周血6 mL，按T-SPOT操作方法实验室分离外周血单个核细胞（PBMCS），调整细胞悬液浓度至2.5≤105 cell/μL加入至4个微孔培养板（分别为阴性对照孔、A孔：ESAT-6、B孔：CFP-10和阳性对照孔），微孔里预包被γ干扰素抗体，微孔中分别加入阴性对照的淋巴细胞无血清培养基、结核特异性抗原ESAT-6、CFP-10、作为阳性对照的植物血凝素；置入37°含有5%的CO2培养箱中培养16～24 h，洗板，加入标记抗体工作液，2～8°孵育1 h后洗板，每个反应孔加入底物显色溶液室温孵育7 min，通风处干燥培养板，记数每个反应孔内深蓝色清晰斑点。结果判定：根据抗原A或抗原B孔的反应判断结果，阴性对照孔数为0～5，阳性样本应为：抗原A或抗原B斑点数减去阴性对照孔斑点数≥6；当阴性对照孔斑点数≥6，阳性样本应为抗原A或抗原B斑点数≥2倍阴性对照孔斑点数。

1.3 观察指标

记录两组患者T-SPOT.TB、结核抗体检测结果；分析不同方法检测的灵敏度及特异度；结核感染组不同CD4+T细胞计数条件下T-SPOT.TB检测阳性率；T-SPOT.TB阳性结果不同数值结核的诊断率。

1.4 统计方法

数据处理方法统计学分析均经SPSS 17.0统计学软件进行处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，并采用 t 检验，计数资料采用[n（%）]表示，采用χ2检验， P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者T-SPOT.TB检测结果及与结核抗体检测结果比较

结核感染组患者T-SPOT.TB检测阳性者64例，阳性率为84.21%，非结核感染组患者T-SPOT.TB检测阳性者21例，阳性率为16.15%；结核感染组阳性率明显高于非结核感染组（χ2=91.656，P<0.01）；结核抗体在两组间的阳性率分别为36.84%、14.62%（χ2=13.455，P<0.01）。T-SPOT.TB检测结核感染的敏感度（84.21%）高于结核抗体（36.84%），差异有统计学意义（χ2=35.687、P< 0.01），特异性两者分别为83.84%、85.38%，两者比较差异无统计学意义（χ2=0.118、P= 0.731），见表1。

2.2 CD4+T淋巴细胞计数在艾滋病结核感染组T-SPOT.TB检测阳性率

艾滋病结核感染组患者在CD4+T淋巴细胞计数≥200 cell/μL条件下T-SPOT.TB检测阳性率（93.75%）高于CD4+T淋巴细胞计数<200 cell/μL组（76.56%），但两组差异无统计学意义（χ2=0.627、P=0.428），见表2。

2.3 T-SPOT.TB检测阳性不同结果结核诊断率

T-SPOT.TB检测阳性患者中，A孔或B孔检测值≤100的结核诊断率为90.24%，高于6≥A孔或B孔检测值<100的结核诊断率（61.36%），差异有统计学意义（χ2=9.516、P=0.002）。见表3。

3 讨论

近几年随着酶联免疫技术的不断发展和日渐完善，T-SPOT.TB检测问世，并在临床结核感染诊断中发挥了重要作用。这项新技术的原理主要为，人体在感染结核分支杆菌后，会形成记忆性T淋巴细胞，再次受到结核分支杆菌相关抗原的刺激后，会造成记忆性T淋巴细胞迅速增殖成效应性T淋巴细胞，同时会分泌出INF-γ，对分泌INF-γ的淋巴细胞数目进行测定，便可以实现对机体是否感染结核分枝杆菌进行判定[3]。其特点是灵敏度高，几乎不受个体免疫功能低下影响；特异性好，不受卡介苗接种与非结核分枝杆菌影响。

在该研究中，结核感染组患者T-SPOT.TB阳性率为84.21%，明显高于非结核感染组16.15%，与文献报道一致[4]；艾滋病合并肺结核患者T-SPOT.TB检测灵敏度84.21%高于结核抗体36.84%，对比差异有统计学意义，与国外对HIV阳性、阴性结核感染T-SPOT.TB检测结果的相关报道差别不大[5]，说明免疫功能对T-SPOT.TB检测结果影响有限。但也有研究[6]显示T-SPOT.TB检测结果和外周血CD4+T淋巴细胞数量有关；从表2可以看出，T-SPOT.TB检测阳性率随CD4+T淋巴细胞计数升高而有所升高，但差异无统计学意义，这可能和χ2检验无法完全满足条件有关；也说明在严重免疫缺陷患者中，T-SPOT.TB检测假阴性结果增多，但结果影响有限。而对T-SPOT.TB阳性结果分析显示，A、B孔效应性T淋巴细胞越多，说明机体受到结核分枝杆菌抗原的刺激也越强烈，相应结核的确诊率也越高（P<0.01）[7]。由此证实，经T-SPOT.TB技术对艾滋病合并肺结核感染进行诊断的准确性、敏感性均较高，对临床诊断工作具有重要辅助作用；但需要注意的是T-SPOT.TB检测目前尚无统一的界值用来鉴别活动性肺结核及潜伏结核感染；且T-SPOT.TB检测存在一定的假阴性结果，尤其是HIV感染者、肿瘤患者、儿童等免疫功能不全情况下，因此需联合其他相关检查来提高结核的诊断率[8]。

综上所述，活动性结核病与潜伏结合感染患者Mtb特异性抗原ESAT-6、CFP-10刺激后SFCs差异存在明显统计学意义，由此可证实，SFCs与疾病活动度、体内抗原负荷等可能存在相关性。通过该次研究证实，T-SPOT.TB技术对艾滋病合并结核感染进行诊断的准确性、敏感性均较高，在今后的临床工作中，值得对其给予足够的重视并广泛应用。

[参考文献]

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[2] 沈颖，陆国华，姚航平，等.esat-6/cfp-10融合蛋白的抗原性分析及其对诊断结核临床应用价值[J].中华医院感染学杂志，2012，22（7）：1531-1534.

[3] 郝贤斌，吴利先.人类免疫缺陷病毒与结核分枝杆菌双重感染的研究进展[J].中国病原生物学杂志，2016，11（4）：374-376.

[4] 张瑛，孙亚蒙，徐欣晖，等.结核感染T细胞斑点试验在结核性疾病中的诊断价值[J].中华临床医师杂志：电子版，2010，4（12）：2431-2434.

[5] 祁燕伟，白劲松，万荣，等.T细胞斑点试验在人类免疫缺陷病毒合并肺结核感染中不同T细胞水平临床诊断价值[J].昆明医学院学报，2011，32（9）：63-67.

[6] 陈仁芳，杨琦恩，陆宇红，等.T-SPOT.TB在艾滋病合并结核感染诊断中的应用[J].江苏医药，2014，40（5）：532-534.

[7] 施伎蟬，蒋贤高，朱海燕，等.T细胞斑点试验对菌阴肺结核的诊断价值[J].中华临床感染病杂志，2012，5（2）：108-109.

[8] 张福杰，卢洪洲.HIV感染者机会性感染防治指南（2009）[M].北京：北京大学医学出版社，2011.

（收稿日期：2017-03-09）