蔡鑫娜，谭敏，曹胜亮，黄艳，孙法超，商营利，刘思当，肖一红

山东农业大学 动物医学院/动物科技学院，山东 泰安 271000

猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4抗体制备与鉴定

蔡鑫娜，谭敏，曹胜亮，黄艳，孙法超，商营利，刘思当，肖一红

山东农业大学 动物医学院/动物科技学院，山东 泰安 271000

蔡鑫娜, 谭敏, 曹胜亮, 等. 猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4抗体制备与鉴定. 生物工程学报, 2017, 33(8): 1276–1283.

Cai XN, Tan M, Cao SL, et al. Preparation and identification of polyclonal antibodies specific for nsp4 protein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Chin J Biotech, 2017, 33(8): 1276–1283.

为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) nsp4的抗体，根据HP-PRRSV TA-12株 (GenBank Accession No. HQ416720) 的nsp4基因序列，设计并合成一对引物。用RT-PCR扩增后克隆到原核表达载体pET-28a(+) 中，构建重组质粒pET28a-nsp4，转化至Trasseta(DE3)，经IPTG诱导重组蛋白获得了高效可溶性表达，大小约为26 kDa。经镍离子亲和柱 (Ni+-NTA) 纯化获得了高纯度重组蛋白，将纯化的nsp4蛋白免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。ELISA检测抗体效价可达106，Western blotting和IFA检测结果表明所制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应特异性，能够识别PRRSV感染宿主细胞中的nsp4蛋白。本研究成功制备了针对nsp4的多克隆抗体，为进一步研究nsp4的功能及PRRSV致病机制奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合症病毒，nsp4，多克隆抗体，鉴定

猪繁殖与呼吸综合征 (Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS) 是由 PRRS病毒 (PRRSV) 引起的一种急性传染病。该病以母猪繁殖障碍、各年龄段猪呼吸系统障碍等为主要特征。该病1987年在美国首次报道[1]，随后迅速在北美洲和欧洲蔓延[2]，我国于1996年由郭宝清等首次从疑似PRRS病例中分离到PRRSV，从而证实了本病在我国的存在[3]。2006年6月我国江西等地出现了高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly pathogenic PRRS，HP-PRRS)[4-6]，感染猪临床特征表现为持续高热、精神萎靡、食欲废绝、呼吸困难、腹部皮肤发绀、耳朵变蓝、眼睑水肿等症状。……