张敏，朱明,，李文宗，马洁，刘悦萍，江海洋，王磊，徐妙云



Ath-miR169d介导的拟南芥叶片发育的分子调控机制

张敏1，朱明1,2，李文宗1，马洁3，刘悦萍3，江海洋2，王磊1，徐妙云1

（1中国农业科学院生物技术研究所，北京100081；2安徽农业大学生命科学学院，合肥230036；3北京农学院生物科学与工程学院，北京102206）

【目的】探究ath-miR169d在拟南芥叶片发育过程中的作用，明确其调控的分子机制，为增强叶菜类植物的光合效率以及增加生物量和提高作物产量提供理论依据。【方法】选取ath-miR169d过表达和降低表达的拟南芥转基因株系以及野生型拟南芥，在22℃、相对湿度60%、16 h/8 h光周期条件下培养，观察不同生长阶段叶片发育表型的差异；同时构建pmiR169d::GUS表达载体，转化农杆菌EHA105，并利用蘸花法转化野生型拟南芥（Columbia，Col-0），获得转基因拟南芥，利用GUS染色对ath-miR169d在拟南芥不同组织器官中的表达模式进行研究；选取8周龄的过表达材料和野生型对照株系，对其叶片表皮细胞形态进行扫描电镜分析；对4周龄过表达材料和野生型对照株系的幼苗顶端分生组织和叶片中总IAA进行定量分析，并进行基因芯片表达谱分析，筛选差异表达基因；通过实时荧光定量PCR对生长素信号途径部分差异表达关键基因的表达情况进行分析。【结果】Ath-miR169d过表达拟南芥株系莲座叶数目较野生型少，叶片小，而ath-miR169d降低表达的拟南芥株系的莲座叶较野生型多，叶片大，且在抽薹和种子成熟之后还持续长出新叶，而野生型莲座叶则在种子成熟之后逐渐衰老干枯；扫描电镜观察到ath-miR169d过表达拟南芥株系叶片中表皮细胞小于野生型；……