安建平，宋来庆，赵玲玲，由春香，王小非，郝玉金



超表达苹果细胞分裂素响应基因影响花青苷积累和盐胁迫抗性

安建平1，宋来庆2，赵玲玲2，由春香1，王小非1，郝玉金1

（1山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018；2烟台市农业科学研究院，山东烟台 265599）

【目的】克隆苹果细胞分裂素响应因子基因（cytokinin response factor 6），鉴定其在调节花青苷积累和盐胁迫抗性中的作用，揭示的功能，为研究细胞分裂素信号途径和果树生长发育调控提供理论依据。【方法】以‘嘎啦’苹果（‘Gala’）为研究材料，利用同源序列比对和PCR技术，分离细胞分裂素响应基因。使用MEGA 5.0软件构建苹果MdCRF6与拟南芥CRFs间系统进化树；通过SMART软件和DNAMAN软件分析MdCRF6蛋白的保守结构域。利用实时荧光定量PCR方法检测该基因对细胞分裂素和盐胁迫的响应。通过电泳迁移率试验（EMSA），验证MdCRF6原核表达蛋白对DRE作用元件的绑定。构建植物超表达载体，并通过农杆菌介导的遗传转化获得转苹果愈伤组织。比较野生型和转基因苹果愈伤组织在花青苷积累和盐抗性方面的差异，结合基因表达分析，初步鉴定在调节花青苷积累和盐胁迫方面的生物学功能。【结果】分离得到了苹果细胞分裂素响应因子基因（基因序列号：MDP0000783818），该基因开放阅读框（ORF）为1 047 bp，编码含有348个氨基酸的蛋白。进化树分析和氨基酸序列比对结果表明，苹果MdCRF6蛋白在N端包含保守的CRF结构域，在C端包含保守的AP2/ERF结构域，并且与拟南芥AtCRF6同源性最高。基因表达分析显示该基因具有细胞分裂素和盐胁迫响应，分别在10 μmol·L-1BA和100 mmol·L-1NaCl处理3 h和6 h时表达量最高。……