张楠楠，薛冬，崔晓霞，赵晋铭，郭娜，王海棠，邢邯



大豆组成型三重反应基因的克隆与功能分析

张楠楠，薛冬，崔晓霞，赵晋铭，郭娜，王海棠，邢邯

（南京农业大学农学院/国家大豆改良中心/农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室/作物遗传与种质创新国家重点实验室，南京210095）

【目的】植物激素乙烯参与植物的生长发育以及生物与非生物胁迫过程。组成型三重反应基因作为乙烯受体下游一个负调控因子，结合乙烯受体共同参与乙烯的信号转导途径。本研究通过对大豆（）的组成型三重反应基因进行克隆和诱导表达分析，以及在大豆发状根中过表达该基因后进行疫霉根腐病的抗性分析，探究在大豆与疫霉菌互作过程中的功能。【方法】利用同源克隆的方法，以拟南芥的序列为探针，在大豆基因组数据库中搜索同源性最高的基因即为大豆的（），并从Williams82中将克隆出来。对进行多重序列比对、系统进化分析和疫霉菌的诱导表达分析。构建植物过表达载体pBinGFP2:。应用发根农杆菌介导的遗传转化方法获得大豆发状根，经GFP荧光筛选得到大豆过表达的阳性发状根和转入空质粒的阴性对照发状根。对过表达发状根和阴性对照发状根侵染疫霉菌后，检测病斑长度、疫霉生物量和抗性相关基因的表达。【结果】根据同源序列比对结果，将与拟南芥（）同源性最高（75.3%）的大豆基因命名为，从Williams82中克隆得到的CDS序列。该基因的CDS序列全长2 511 bp，编码836个氨基酸的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，蛋白质量为92.35 kD，等电点为6.51。……