多重PCR技术用于食源性金黄色葡萄球菌肠毒素的检测

金黄色葡萄球菌是造成食物中毒、化脓性疾病的常见菌种，在土壤、空气、水源中均有广泛分布，由于污染食物的概率大，因此成为一项公共卫生问题。就目前而言，已知的肠毒素种类包括19种，由于缺少特异检测手段，尚且不能明确食物中毒的机制。基于此，本文选取145株金黄色葡萄球菌进行研究，探讨了多重PCR检测技术的应用效果。

材料与方法

菌株来源 145株金黄色葡萄球菌从食物检测样本中提取，其中食源性致病菌检测样本110株，包括熟肉、速冻制品、凉拌菜、沙拉、果汁等；食物中毒样本35株，从患者剩余食物、粪便、肛拭子中获得。

仪器试剂 Baird-Parker琼脂培养基、血平板、亚碲酸钾卵黄增菌液，均由北京陆桥技术股份有限公司提供；溶菌酶、基因组提取试剂盒、PCR引物，由上海生工生物工程公司提供；细菌培养箱是由德国宾德公司提供；基因扩增仪、毛细管电泳仪、微量分光光度计等，是由美国IBM公司提供。

方法 菌株复苏:在菌株磁珠冻存管中，用接种环挑取1颗磁珠，放于营养琼脂肉汤中，在37℃温度下培养24小时，并观察其浑浊度。基因提取:取混浊菌液1ml放在1.5ml的EP管内，10000rpm离心3min。除去上层清液，向沉淀物加入200μl溶菌酶溶液（浓度为50mg/ml），混合均匀后，在37℃条件下静置1小时。然后按照DNA提取试剂盒上的说明提取DNA，用微量分光光度计，测定提取DNA的浓度，加纯水直至浓度达到10ng/μl，并保存在-20℃的环境中。引物设计和片段测序:参考GenBank数据库、应用Primer remier分析软件，分别对9种肠毒素基因的PCR引物进行筛选和设计，见下表1。……