姚侃男 冯彩珠 朱肖鸿

1 浙江中医药大学第一临床医学院 浙江 杭州 310053 2 浙江省中医院 浙江 杭州 310018

中药研究

枳椇子对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞产生细胞因子表达的影响

姚侃男1冯彩珠1朱肖鸿2#

1 浙江中医药大学第一临床医学院 浙江 杭州 310053 2 浙江省中医院 浙江 杭州 310018

枳椇子 RAW264.7巨噬细胞 脂多糖 TLR4

实验组在先期研究中已得到枳椇子可以减轻酒精灌胃大鼠炎症及脂肪变[1]。本文在先期研究基础上，探索枳椇子对LPS作用于RAW264.7巨噬细胞所产生的细胞因子的影响及其相关机制，明确枳椇子对肠源性内毒素血症的保护作用。

1 材料

1.1 药品与试剂：枳椇子颗粒剂购自江阴天江药业有限公司；LPS购自Sigma公司；RAW264.7；30%丙烯酰胺（29:1）、RIPA组织细胞快速裂解液、过硫酸铵、SDS、Tris购自Solarbio公司；BCA蛋白定量试剂盒、SYBR Green PCR试剂盒购自Thermo公司；蛋白预染Marker、逆转录试剂盒购自Fermentas公司；Rabbit anti TLR4 Polyclonal antibody（96kD）、Rabbit anti p65（65kD）购自Proteintech公司；p-p65（65kD）购自Aff inity公司；甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase GAPDH）（37kD）购自CST公司；羊抗兔HRP标记二抗、驴抗山羊HRP标记二抗、羊抗鼠HRP标记二抗购自碧云天公司；NC膜、发光液购自Mi l lipore公司；PBS磷酸盐缓冲液购自上海长岛抗体诊断试剂公司；脱脂奶粉购自BD分装公司；Tween-20购自Amresco公司；Trizol购自Invit rogen公司；DEPC处理水购自基尔顿生物；异丙醇、无水乙醇、氯仿购自国药集团。

1.2 主要仪器：TG-16M型低温冷冻离心机购自上海卢湘离心机仪器有限公司；K30型涡旋振荡器购自青浦泸西仪器厂；ABI-7300型Real-time检测仪购自ABI公司；PRO200型电动匀浆仪购自FLUKO公司；mini protean 3 cel l型电泳仪购自BIO-RAD公司；PS-9型电转仪购自大连竞迈科技有限公司；MK3型酶标仪购自芬兰雷勃酶标仪；P型移液器购自吉尔森公司；……