尹晓然,冯 诚,马一楠,高晓燕,刘 欣,贾丽君,张寅斌,张 军

(1西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科,西安 710004;2西安交通大学医学院第二附属医院消化科;*通讯作者,E-mail:yinxiaoran@163.com)

OE19肿瘤干细胞的无血清分离培养以及肿瘤干细胞特性的鉴定

尹晓然1*,冯 诚2,马一楠1,高晓燕1,刘 欣2,贾丽君1,张寅斌1,张 军2

(1西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科,西安 710004;2西安交通大学医学院第二附属医院消化科;*通讯作者,E-mail:yinxiaoran@163.com)

目的 从人Ⅱ型食管胃交界处腺癌OE19细胞中分离富集肿瘤干细胞的悬浮肿瘤细胞球,鉴定该悬浮肿瘤球细胞的肿瘤干细胞生物学特性。 方法 使用无血清培养法从OE19细胞株中富集得到悬浮肿瘤细胞球,并将其传代扩增;同时常规培养OE19亲本细胞。采用MTT实验、单细胞克隆形成实验、血清分化实验以及Transwell实验,研究OE19悬浮肿瘤球细胞与OE19亲本细胞的增殖、更新、分化和侵袭能力的差异;使用real-time PCR以及Western blot法检测两者肿瘤干细胞标志ABCG2和CD133的表达情况;使用裸鼠成瘤实验研究OE19悬浮肿瘤球细胞以及OE19亲本细胞的体内成瘤能力。由此鉴定悬浮肿瘤球细胞的肿瘤干细胞特性。 结果 在无血清培养条件下,OE19细胞能够形成悬浮肿瘤细胞球。悬浮肿瘤球细胞具有稳定传代的特性以及多向分化的潜能。OE19悬浮肿瘤球细胞与OE19亲本细胞相比较高表达肿瘤干细胞标志ABCG2和CD133(P<0.05),其体外增殖、自我更新、克隆形成、侵袭转移以及裸鼠体内成瘤能力均高于OE19亲本细胞(P<0.05)。 结论 通过无血清非黏附培养法可以有效富集OE19悬浮肿瘤细胞球。该悬浮肿瘤球细胞高表达肿瘤干细胞标志分子ABCG2和CD133,具有肿瘤干细胞特性。

食管胃交界处腺癌; OE19细胞; 无血清培养; 肿瘤干细胞; 肿瘤细胞球

20世纪80年代以来，世界范围内的食管鳞癌和胃远端肿瘤的发病率明显下降，而美国白人、欧洲国家人群以及我国食管胃交界处腺癌(esophageal-gastric junction adenocarcinoma, AEG)的发病率逐年升高[1]。……