邬贤凤，余 颖，陈红舟，周吉航

(浙江省舟山医院 妇产科，浙江 舟山 316000)

健康科学临床研究

不同剂型干扰素治疗高危型HPV亚临床感染的对比分析

邬贤凤，余 颖，陈红舟，周吉航

(浙江省舟山医院 妇产科，浙江 舟山 316000)

目的 对比分析重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊和重组人干扰素α-2b栓治疗高危人乳头状瘤病毒(HR-HPV)亚临床感染的临床疗效和安全性。方法 将138例高危型HPV亚临床感染患者随机分为两组：A组采用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊进行治疗，80万IU/d，每日一次，每月连续12 d；B组采用重组人干扰素α-2b栓治疗，10万IU/d，隔日一次，每月连续20 d，均治疗6个月；对比有效率和不良反应发生率，并于治疗前后取宫颈脱落细胞，采用实时定量PCR实验测定E6、E7 mRNA表达水平。结果 A组临床有效率显著高于B组(P<0.05)，并发症发生率与B组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前，A、B两组患者的E6、E7mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组患者的E6、E7mRNA表达水平均显著降低，且A组的降低幅度明显大于B组(P<0.05)。结论 与重组人干扰素α-2b栓相比，重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊治疗HR-HPV，能够更加有效的下调E6、E7 mRNA表达，提高用药疗效。

重组人干扰素α-2b；泡腾胶囊；栓剂；高危人乳头状瘤病毒；亚临床感染

宫颈癌是威胁女性健康的第三大恶性肿瘤，高危型人乳头状瘤病毒(high-risk human papillomavirus，HR-HPV)持续感染并整合入宿主细胞是其主要诱因。研究表明，HR-HPV基因整合后，E2基因断裂，失去了对E6、E7基因的抑制作用，而E6、E7基因能够破坏抑癌基因p53和pRb的蛋白形态，使细胞进入过度增生而诱发宫颈癌[1]。干扰素历来是临床治疗HPV感染的一线药物，由免疫细胞分泌，是一类高活性、多功能的免疫介质。其剂型较多，应用方式多样[2-3]。本院在近两年，主要应用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊和重组人干扰素α-2b栓治疗HR-HPV亚临床感染，本研究将E6、E7表达状态纳入其临床疗效的考察范围，比较这两种药物的应用疗效和安全性，以期为临床合理用药提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2013年10月—2016年9月收治的138例HR-HPV亚临床感染妇女，纳入标准：①经阴道镜、TCT和宫颈活检确诊为HR-HPV亚临床感染；②年龄18～50周岁，经期规律；③自愿签署知情同意书。排除标准：①宫颈癌及宫颈上皮内瘤变；②肉眼可见尖锐湿疣；③急性生殖道炎症；④妊娠期及哺乳期。采用随机数字表将患者分为两组各69例，两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05，表1)。

表1 两组患者一般资料对比

1.2 HPV分型方法 采用流式荧光杂交法进行HPV分型检测，主要步骤：(1)取宫颈上皮脱落细胞，采用脱落细胞核酸释放剂提取DNA。(2)用上海透景生命科技有限公司提供的试剂盒，添加通用引物、globin引物、内参基因，加入PCR仪(TC-9600，LABNET公司)进行扩增，扩增条件95 ℃预变性5 min，(95 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s)5个循环，(95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s)35个循环，72 ℃延伸3 min。(3)将3 μL PCR扩增产物和22 μL微球杂交液进行混合，并经过95 ℃ 5 min变性，48 ℃ 30 min杂交后，加入75 μLSA-PE荧光素标记48 ℃孵育15 min，迅速移至Luminex多功能流式点阵仪检测分析。所有操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 治疗方法 A组患者予以重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊(上海华新生物高技术有限公司，S20050075)，80万IU×4粒/盒，1粒/d，月经干净第3 d，睡前置入阴道深处，每月连续使用12 d，连用6个月。B组患者予以重组人干扰素α-2b栓(安徽安科生物工程股份有限公司，S20020103)，10万IU×3粒/盒，1粒/d，月经干净第3 d，睡前注入阴道深处，隔日1次，每月连续使用20 d(10次)，连用6个月。

1.4 观察指标

1.4.1 临床疗效和安全性 治疗三个月后，根据以下标准评价有效率。治愈：宫颈醋酸白上皮完全消失，HPV转阴；缓解：宫颈醋酸白上皮面积减少或厚度变薄，HPV至少有一种亚型转阴；无效：宫颈醋酸白上皮面积和厚度改变，HPV无转阴或恶化。有效率=[(治愈+缓解)/总例数]×100%。并记录用药期间有无并发症发生，干扰素常见并发症包括：瘙痒、下腹坠胀、分泌物增多或局部灼痛感。

1.4.2 E6、E7mRNA表达 采用新乡科蒂亚生物技术有限公司提供的冷光仪及配套试剂盒(宫颈稳态检测试剂盒、HPV E6/E7 mRNA检测试剂盒)测定E6、E7 mRNA表达水平。主要步骤：(1)用宫颈稳态检测试剂盒(化学发光)中裂解液将宫颈细胞裂解。(2)检测缓冲液配置：1 μL封闭反应液+17 μL裂解液+31 μL dd H2O+1 μL检测探针。(3)布板：标本(50 μL)+标本检测缓冲液(50 μL)，用封条贴纸裹紧整块板，放入55 ℃保温箱保温3.5 h。(4)3步信号放大。(5)上冷光仪检测。

2 结 果

2.1 临床疗效和安全性 A组有效率显著高于B组(P<0.05，表2)。治疗期间，A组发生4例阴道瘙痒、4例局部疼痛、5例灼热感，不良反应发生率18.8%；B组发生3例阴道瘙痒、4例灼热感，不良反应发生率10.1%；两组间不良反应发生率差异无统计学意义(χ2=2.105，P=0.147)。

表2 两组患者临床疗效对比[n(%)]

2.2 E6、E7 mRNA表达 治疗前，两组患者E6、E7 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组的E6、E7 mRNA表达水平均显著降低，且A组患者的降低幅度明显大于B组(P<0.05)；见表3。

表3 两组患者治疗前后E6、E7 mRNA表达水平对比

3 讨 论

干扰素是病毒进入机体后宿主细胞产生的一种免疫活性物质，重组人干扰素α-2b具有广谱抗病毒活性，其作用机制包含以下方面[4-5]：(1)提高机器免疫监视和应答功能，及时清除病毒；(2)与靶细胞表面的干扰素受体结合，阻止局部病毒蛋白质合成；(3)调节机体内分泌功能，如雌二醇、孕酮等，改善生殖道内环境，从而抵御病毒感染。重组人干扰素α-2b剂型众多，不同剂型有不同的优缺点。相较于栓剂，阴道泡腾胶囊的有效成分高出8倍，由于剂量差异较大，前者可能有效性更高，但副作用更明显。本研究结果显示，A组有效率明显高于B组；两组不良反应均为干扰素相关不良反应，A组稍高于B组，但组间差异无统计学意义，这说明重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊能够在保障安全性的基础上实现大剂量用药。

泡腾胶囊是含有泡腾崩解剂的一种新剂型，与栓剂相比体积小，携带方便，泡腾胶囊本身干燥不含水分，进入机体后遇水迅速崩解和融化，崩解产生的大量泡沫，增加了药物与病变部位的直接接触面积[6]，从而使有效成分均匀地分布于宫腔表面，包括宫颈口和阴道各侧壁，故而不会因局部药物浓度过高而诱发的副反应，这也是泡腾胶囊可以实现大剂量用药的主要原因；而栓剂因无法在宫腔内部涂抹均匀，故不适用于过大剂量用药；作者认为这是泡腾胶囊取得更高疗效的主要原因。

临床调查结果显示，99.0%以上的宫颈癌是由HR-HPV持续感染并与宿主细胞发生基因整合所致[7]。从DNA结构来看，HPV包括早期基因区(E)、晚期基因区(L)和长控制区(LCR)三个部分，负责病毒复制、转录、翻译及细胞转化的主要是E区，包含E1～E7，其中与持续感染及DNA整合关系最为密切的是E6与E7。当前研究已证实宫颈癌的发生、发展是一个长期、渐变的过程，其中HR-HPV E6与E7mRNA持续高表达是该过程的关键因素[8]。也有研究指出E6与E7阳性表达率在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌中依次升高，其中在≧CINⅡ中达到93%以上，在宫颈癌中为100%[9]。近年研究证实除了E6和E7的mRNA表达水平以外，其基因突变也是与宫颈癌发生与发展密切相关，更是证实了两者的重要性[10]。因此作者认为评价HR-HPV感染的治疗疗效时，E6与E7mRNA必不可少。本研究结果显示，治疗后，患者的E6、E7 mRNA表达水平均有降低，且A组患者的降低幅度明显高于B组。该结果从病毒基因学角度证实了重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊的治疗效果优于重组人干扰素α-2b栓。

综上所述，与重组人干扰素α-2b栓相比，重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊治疗HR-HPV，能够更加有效地下调E6、E7 mRNA表达，提高用药疗效。但本研究病例数较少，且随访时间较短；HR-HPV感染具有复发性，短期疗效和中远期疗效之间可能存在较大的差异；因此，在以后的研究中，还需设计大样本、长期随访的实验方案加以证实。

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[6]沈姚琴,王华,邓娟.自拟除湿解毒汤联合重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊治疗宫颈高危型HPV感染的疗效观察[J].中国现代应用药学,2014,31(5):603-606.

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[9]莫小亮,罗殿中,党裔武,等.不同程度宫颈病变单一、多重高危型HPV感染状态下E6/E7 mRNA的表达[J].重庆医学,2014,43(18):2268-2271.

[10]殷复粉,王宁,于啸,等.宫颈癌细胞系中HPV16 E6、E7及E6/E7基因对STK31基因甲基化状态及表达的影响[J].中国癌症杂志,2015,25(9):641-651.

Effects of different formulations of interferon in treating high risk HPV: a comparative study

WU Xian-feng， YU Ying， CHEN Hong-zhou， ZHOU Jie-hang

(DepartmentofObstetrics&Gynecology，ZhoushanHospital，Zhoushan316000，China)

Objective To evaluate the clinical effects and sec urity of recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule and human recombinant interferonα-2b turunda in treating high-risk human papillomavirus (HR-HPV) subclinical infection. Method 138 patients with HR-HPV infection were divided into 2 groups. Group A were treated with recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule， 800， 000 IU/d， QD， 12d/months for 6 months. Group B were treated with recombinant interferonα-2b turunda， 100，000 IU/d， QID， 20d/months for 6 months. The effective rate and complications rate between groups were compared. The exfoliated cells were extracted to detect E6、E7 mRNA expression by PCR assay. Findings The clinical effective rate of Group A was higher than Group B (94.6% VS 72.2%，P<0.05). No significant difference was found between the two groups in complications rate (18.8% VS 10.1%，P>0.05). Before treatment， the E6 and E7 mRNA expression levels of Group A and B were 0.625±0.103 VS 0.633±0.114 and 0.437±0.053 VS 0.420±0.061. There was no significant difference between the two groups (P>0.05). After treatment， the E6 and E7 mRNA expression levels of Group A and B were 0.175±0.026 VS 0.294±0.034 and 0.214±0.036 VS 0.304±0.049 respectively， with those of Group A being lower than those of Group B. The difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion Compared to human recombinant interferonα-2b turunda， the recombinant human interferonα-2b vaginal effervescent capsule has higher ability to down regulate E6、E7 mRNA expression and improve the effect in treating HR-HPV subclinical infection．

recombinant human interferonα-2b; vaginal effervescent capsule; turunda; HR-HPV; subclinical infection

2016-11-19

邬贤凤(1982-)，女，浙江舟山人，本科，主治医师。

10.3969/j.issn.1674-6449.2017.03.014

R452

A

1674-6449(2017)03-0283-04