冯 博许理文王凤格薛宁宁刘文彬,2易红梅

田红丽1吕远大3赵 涵3金石桥4张力科4蔚荣海2赵久然1

1北京市农林科学院玉米研究中心 /玉米DNA指纹及分子育种北京市重点实验室,北京100097;2吉林农业大学农学院, 吉林长春130118;3江苏省农业科学院农业生物技术研究所,江苏南京210014;4全国农业技术推广服务中心,北京100125

玉米InDel标记20重PCR检测体系的建立

冯 博1,2,**许理文1,**王凤格1,*薛宁宁1刘文彬1,2易红梅1

田红丽1吕远大3赵 涵3金石桥4张力科4蔚荣海2赵久然1

1北京市农林科学院玉米研究中心 /玉米DNA指纹及分子育种北京市重点实验室,北京100097;2吉林农业大学农学院, 吉林长春130118;3江苏省农业科学院农业生物技术研究所,江苏南京210014;4全国农业技术推广服务中心,北京100125

为构建玉米多重PCR检测体系,提高分子标记检测效率,利用10份代表性玉米材料对238对InDel引物进行单重PCR评估,共得到192对扩增效率高、稳定性好的引物。根据软件评估结果、扩增质量、产物范围、染色体均匀分布原则从192对引物中优选出30对综合表现较好的引物形成扩增产物范围在80~200 bp和200~400 bp的两组核心引物组合,每套组合中有10对引物分布在不同染色体上。在核心引物组合的基础上综合考虑染色体分布、碱基片段范围、引物荧光颜色,逐一添加引物,最终形成两组玉米20重PCR体系,一组40重荧光标记毛细管电泳。

玉米;InDel;多重PCR

多重PCR(multiplex PCR)是在常规PCR的基础上改进的,在同一个PCR反应体系中加入多对引物,对多个DNA模板或同一模板的不同区域同时扩增多个目的片段的技术,这个概念由Chambercian等和Mullis等[1-2]率先提出。……