杨丽莎，范剑薇，梁志清，唐美媛，吴淋玲，张 兵，聂 琳，王君宜

(桂林医学院附属医院，广西 桂林 541001)

【临床基础】

慢性乙型肝炎证候虚实分类与外周血淋巴细胞亚群的关系

杨丽莎，范剑薇，梁志清，唐美媛，吴淋玲，张 兵，聂 琳，王君宜

(桂林医学院附属医院，广西 桂林 541001)

目的：了解慢性乙型肝炎(CHB)患者中医证候虚实分类与外周血淋巴细胞亚群之间的关系。方法：将CHB患者进行证候虚证、实证及虚实夹杂证分类，并检测其外周血T、B细胞及自然杀伤(NK)细胞亚群，并对其3个证型组的指标进行分析。结果：CHB 虚证、实证及虚实夹杂3个组的CD4+T细胞百分比均较对照组低(；CD8+T细胞百分比由高至低依次为实证组、虚实夹杂证组、对照组、虚证组，实证组CD4+/CD8+比值显著低于虚证组或对照组，3个组的B细胞百分比均高于对照组，NK细胞百分比低于对照组。结论：CHB存在着免疫调节紊乱,证候虚实分类与外周血淋巴细胞亚群之间存在一定的相关性，中医虚实证辨证结合免疫功能检测具有一定的临床意义。

慢性乙型肝炎；免疫状态；中医虚实分类；T淋巴细胞；B淋巴细胞；NK细胞

我国一般人群乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus, HBV)流行率7.18%，估计约9300万人为慢性HBV感染,其中慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B CHB)患者约2000万例[1]，中西医结合防治CHB是我国独特的方法，中医药对人体免疫功能的影响是大多数中药抗病毒的主要机制之一，其治疗优势在于辨证论治。本研究将CHB患者按照中医辨证虚实分类，通过检测其外周血T、B细胞及NK细胞亚群的百分比, 探讨中医证候虚实病机与免疫机制之间的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年9月至2015年12月广西桂北地区范围在桂林医学院附属医院及附属传染病院符合慢性乙型肝炎的患者200例，年龄在18～60岁(36±11)，病程在1～3年。通过中医专家进行虚实证分类，虚证共70例，其中男性51例，女性19例；实证共97例，其中男性67例，女性30例；虚实夹杂证共33例，其中男性20例，女13例。同时选取60例健康献血员作为对照组。

1.2 研究对象

1.2.1 纳入标准 参考《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》[1]，检测血清HBV标志物HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性，HBV-DNA≥ 105copies/ml(中、高复制),肝功能ALT持续或反复升高≥100 U，病程在半年以上，排除其他引起肝脏损伤的病因。

1.2.2 虚实辨证纳入标准 依据《病毒性肝炎中医辨证标准》《中医诊断学》及2002年《中药新药临床研究指导原则》[2-4]，临床辨证分为虚证类:主症面色萎黄、胁肋隐痛不适、头晕乏力、纳少、便溏等,舌质淡红,苔薄白或少苔脉弱或细等；实证类:主证恶心厌油、胁肋胀痛或刺痛、大便秘结或秽臭、小便黄、舌质红或紫暗，或有瘀斑、苔黄或腻或粗干，脉弦或弦滑或数等；虚实夹杂类既有虚证又有实证的表现。

1.3 排除标准

排除其他类型肝炎；正在使用核苷(酸)类似物和干扰素等抗病毒药物或免疫调节剂；已明确诊断为肝癌者；合并严重的心、脑、肾、肺功能障碍及重症糖尿病；无自身免疫性疾病史、嗜酒史及肝毒性药物使用史。

1.4 血清学指标检测方法

血清学检测采自不同组别受试者静脉血。采用酶法检测肝功能。采用时间分辨免疫荧光分析法检测HBV血清标记物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)。采用实时荧光探针定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,检测HBV-DNA。外周血淋巴细胞亚群检测，采用四色荧光标记流式细胞术(Flow cytometry,FCM)，四色淋巴细胞亚群试剂，溶血素0.01 mol/L磷酸缓冲液(PBS),EDTA抗凝血。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，采用单因素方差分析，统计学显著性检验水准为0.05(双侧)，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

表1显示，慢性乙型肝炎3个组的CD3+T细胞百分比较对照组差异无统计学意义(P>0.05)；CD4+T细胞百分比与对照组比较，对照组均高于虚证组、实证组及虚实夹杂证组(P<0.05)。CD8+T细胞百分比由高至低依次为实证组、虚实夹杂证组、对照组、虚证组(P<0.05)。CD4+/CD8+比值4个组比较，由高至低依次为虚证组、对照组、虚实夹杂证组、实证组(P<0.05)。B淋巴细胞百分比3个组与对照组比较均升高(P<0.05)，NK细胞百分比3个组与对照组比较均降低(P<0.05)。

组别例数CD3+T细胞(%)CD4+T细胞(%)CD8+T细胞(%)CD4+/CD8+B细胞(%)NK细胞(%)虚证7070.5±9.632.9±6.0*19.2±6.1*1.81±0.4*15.3±4.2*9.93±5.8*实证9771.1±9.831.7±6.6*30.2±6.5*△1.05±0.4*△15.7±5.1*10.5±5.6*虚实夹杂证3370.9±9.132.5±5.9*27.6±5.7*△1.24±0.4*△15.5±4.5*10.2±5.4*对照组6072.1±8.240.4±6.623.8±5.91.62±0.411.5±4.314.6±5.6

注:与健康对照组比较:*P<0.05；与虚证组比较:△P<0.05

3 讨论

HBV感染引起肝脏慢性炎症，主要取决于病毒学和免疫学，尤其是免疫学因素在很大程度上决定了疾病进展与否。当机体感染HBV后，人体各淋巴细胞亚群间的平衡被打破，表现为外周血淋巴细胞亚群百分比、绝对数或功能改变，临床常进行外周血淋巴细胞免疫功能检测，以评估患者的病情及预后。其中，CD3+细胞代表总T淋巴细胞。T淋巴细胞依其表型及功能的不同可以分为CD4+与CD8+2个亚群，CD4+T细胞主要为辅助T细胞(Th)，在免疫应答中起辅助和诱导作用；CD8+T细胞主要为细胞毒性T细胞(cytotoxic lymphocyte CTL)，是免疫系统清除病毒感染细胞的主要效应细胞；CD4+/CD8+比值变化可反映机体细胞免疫功能，是衡量机体免疫平衡的重要标志。B淋巴细胞是人体内主要体液免疫细胞。自然杀伤(Natural killer NK)细胞是机体天然免疫的主要承担者,在天然免疫中发挥重要作用[5]。

HBV感染后导致机体免疫紊乱,表现出不同的免疫状态与中医证候有一定的相关性。由于机体正气不足，湿浊困遏，脾失健运，肝失条达，气血不和等，临床上出现肝郁脾虚、脾气虚弱、肝肾不足、肝胆湿热及瘀血阻络等为代表的虚证或实证或虚实夹杂等证[6-7]。关于CHB辨证分型与淋巴细胞免疫功能关系的研究表明，部分指标可以作为临床辨证的参考依据[8]。探讨CHB外周血淋巴细胞百分比变化与虚实证之间的关系，以进一步了解外周血淋巴细胞亚群对CHB中医证候形成的机制。

本研究结果显示，CHB虚证、实证、虚实夹杂证型组的CD3+T细胞百分比与对照组比较无统计学意义，提示CD3+T细胞对CHB虚证、实证、虚实夹杂证型所起的免疫作用无明显的差别。CHB虚证、实证、虚实夹杂证型组的CD4+T细胞百分比均较对照组低，提示机体免疫功能低下、体内特异性抗体生成不足不能清除游离的HBV。CD8+T细胞百分比由高至低依次为实证、虚实夹杂证、对照组、虚证，中医认为实证主要是病邪过盛“邪正相争”，CD8+T细胞百分比高于其他证，提示CTL介导的免疫损伤是以实证、虚实夹杂证为主要矛盾的病理基础。虚证为正气不足，是CD8+T细胞过多消耗或产生较少，免疫功能紊乱，以致“正虚邪恋”，因此CD8+T细胞可以作为中医虚证的参考指标。CD4+/CD8+比值在CHB中实证显著低于虚证或对照组，表明CHB患者机体证候虚实表现与现代免疫功能的变化存在一定的关系。

CHB虚证、实证、虚实夹杂证型组的B细胞百分比均高于对照组，但虚实证组之间比较差异无统计学意义，这表明体液免疫在抵抗HBV中起一定的作用，特别是机体免疫处于清除状态时尤为明显。CHB虚证、实证、虚实夹杂证型组的NK细胞百分比显著低于对照组，提示NK细胞数目的减少可能与机体免疫损伤程度有一定的关系。

综上所述，CHB患者存在着免疫调节紊乱，中医辨证虚实分类与T、B及NK细胞亚群之间存在一定关系，免疫功能检测对于临床虚实证的判定具有一定的作用。

[1] 中华医学会肝病学分会,中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].中国病毒病杂志,2011,1(1):9-23.

[2] 中华医学会肝脏病学分会,感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[J].中华肝脏病杂志,2005,13(12): 881-891.

[3] 中国中医药学会内科肝病专业委员会．病毒性肝炎中医辨证标准[J]．中医杂志,1992,5(5):39-40．

[4] 中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则[S]．北京：中国中医药科技出版社,2002:147-156．

[5] MONDELLI M U,VAREHETTA S,OLIVIERO B.Natural killer cells in viral hepatitis:facts and controversies[J].Eur J Clin Invest,2010,9(40):851-563.

[6] 王见义,韩向晖,王灵台,等.慢性乙型肝炎中医证型与免疫功能的相关性研究[J].上海中医药杂志,2007,41(9):35-36.

[7] 杨丽莎,范剑薇,梁志清.慢性乙型肝炎病毒感染者不同免疫状态的中医证候特点[J].中医杂志,2013,54(13):1135-1137.

[8] 唐翔宇,杨丽莎,唐美媛.广西桂北地区慢性HBV感染不同免疫状态与外周血T、B细胞亚群和NK细胞的相关性研究[J].重庆医学,2013,42(5):496-498.

Chronic Hepatitis B TCM Syndrome Classification and the Relationship Between Peripheral Blood Lymphocyte Subsets

YANG Li-sha， FAN Jian-wei，LIANG Zhi-qing， TANG Mei-yuan，WU Lin-ling， ZHANG Bing， NIE Li，WANG Jun-yi

(AffiliatedHospitalofGuilinMedicalCollege,Guilin,Guangxi541001,China)

Objective:Understand the patients with chronic hepatitis B(CHB) nakedness of TCM syndrome classification and the relationship between peripheral blood lymphocyte subsets.Methods:The patients with CHB were divided into asthenia syndrome (AS) group and sthenia syndrome(SS) group, deficiency and excess syndrome (DES) group, and detect the peripheral blood T and B cells and natural killer (NK) cells, the three card type group index were analyzed. Results In chronic hepatitis B, AS and SS, DES with three groups CD4+T cell percentages are lower than normal control group, CD8+T cell percentage were SS group>the DES group>control group>the AS group. the ratio of CD4+/CD8+SS group were significantly lower than the AS group or control group, the three group B lymphocyte percentage is higher than the control group, the percentage of NK cells is lower than the control group.Chronic hepatitis B have immune dysfunction, CHB of TCM classification have relationship with T and B cell subsets and NK cells, virtual empirical differentiation of TCM combined with immune function test has a certain clinical significance.

chronic hepatitis B; immune status; TCM syndrome classification; T-lymphocytes; B-lymphocytes; NK cell

国家自然科学基金资助项目(81260602)-HBV感染不同免疫状态证候要素与外周血淋巴细胞亚群的关系

杨丽莎(1957-)，女，桂林人，教授，医学学士，从事中西医结合肝病的临床与基础研究。

R512.6+2

A

1006-3250(2017)05-0669-03

2016-10-17