沙仁高娃

核酸是生物體的基本组成物质，是重要的生物大分子，从高等动物，植物到简单的病毒都含有核酸。核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两大类。RNA是基因表达中间产物，同时也是RNA病毒的遗传物质，对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。RNA分离纯化技术是分子生物学研究中的基本技术，TRIZOL试剂法提取RNA既快速有高效，TRIZOL法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌从几十毫克至几克样品中提取RNA。用TRIZOL法提取的总RNA无蛋白和DNA污染。本实验对TRIZOL试剂法进行改进，目的在于获得快速高效提取马肝脏总RNA的方法，为有关马肝脏RNA分子生物学研究奠定基础。

1.材料与试剂

1.1材料

马肝脏

1.2主要试剂

无RNA酶灭菌水，氯仿，乙醇，TRIZOL试剂，液氮，DEPC水。

1.3主要仪器

冷冻台式高速离心机，研钵，低温冰箱，冷冻真空干燥器，电泳仪，紫外光检测仪，电泳槽。

1.4注意事项

1.4.1全程必须戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的提取并成为RNA酶的来源。

1.4.2使用灭菌的一次性塑料器皿避免使用公共仪器所导致RNA酶交叉污染。

1.4.3在TRZOL中RNA是隔离在RNA酶污染之外而对样品的后续操作要求用无RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150度的轰响中烘烤4小时。

2.提取RNA

1.把0.1g肝脏剪碎放入研钵中加入少量液氮.迅速研磨，待组织变软再加液氮，再研磨，这样三次后室温放置5分钟将样品转到2.0ml的离心管中。

2.粉末溶化前加入1mlTRIZOL试剂.混匀。用力振荡15/30s，平放离心管在冰板上5min。在4℃，12000g下离心10min。

3.取上清2ml离心管中，加入与上清等体积的氯仿，上下颠倒混匀。……