辛婧，叶磊，杨可，沈亚非，邓飞

[1.河南省漯河市中心医院（漯河市医学高等专科学校第一附属医院）内分泌科，河南 漯河 462000；2.河南省漯河市召陵区人民医院神经内科，河南 漯河 462000]

辛婧1，叶磊2，杨可1，沈亚非1，邓飞1

[1.河南省漯河市中心医院（漯河市医学高等专科学校第一附属医院）内分泌科，河南 漯河 462000；2.河南省漯河市召陵区人民医院神经内科，河南 漯河 462000]

目的构建小鼠11β-羟类固醇脱氢酶基因的慢病毒真核表达载体PLJM1-11β-HSD1-GFP，建立小鼠前体脂肪细胞（3T3-L1）高表达基因的稳定感染细胞株，为基因的功能研究奠定基础。方法利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）从小鼠肝脏cDNA中扩增11β-HSD1开放阅读框ORF，构建针对基因的真核表达载体，转化感受态DH5α菌株，抽提质粒并进行测序鉴定。用测序成功的质粒和慢病毒包装质粒共同转染293T细胞，产生慢病毒并转染3T3-L1细胞。根据绿色荧光效率挑取单克隆细胞团筛选出稳定细胞株，通过Western blot鉴定PLJM1-11β-HSD1-GFP转染成功。结果经酶切、PCR及测序验证，PLJM1-11β-HSD1-GFP真核表达载体构建成功，并包装慢病毒，绿色荧光效率90%以上，并利用其慢病毒悬液成功感染3T3-L1细胞，筛选出的稳定感染细胞株的3T3-L1细胞成功高表达11β-HSD1蛋白。结论成功构建了基因的真核表达载体，并建立高表达的稳定感染细胞株PLJM1-11β-HSD1-GFP-3T3-L1，为进一步研究基因的功能，特别是在肥胖中的研究奠定了基础。

基因；真核表达载体；前体脂肪细胞；肥胖

11β-羟类固醇脱氢酶（11beta-hydroxysteriod dehydrogenase，11β-HSD1）在体内广泛分布，表达于脂肪、肝脏、肌肉、性腺及中枢神经系统等，以脂肪组织和肝脏中的含量最高[1]。……