何清英 罗志华 林棉杰 陈俊杰 邓秋怡 温斌 陈珺

摘要 [目的]探讨电刺激对铁皮石斛原球茎中石斛碱含量的影响。[方法]采用铁皮石斛原球茎培养基扩增培养铁皮石斛原球茎，并将扩增所得原球茎随机分为试验组和对照组，其中试验组给予不同时间电刺激（25 V），对照组不做处理，正常培养15 d后，以氯仿热回流法提取原球茎中的石斛碱，紫外分光光度法测定石斛碱含量。[结果]与对照组相比，经电刺激（25 V）1 和2 h的试验组铁皮石斛原球茎石斛碱含量显著增加（P<0.05），而经电刺激（25 V）3 h的试验组铁皮石斛原球茎石斛碱含量下降（P<0.05）。[结论]25 V电刺激1、2 h能够促进铁皮石斛原球茎中的石斛碱积累，这可能与电刺激能改变原球茎中细胞的渗透性、增强对培养基中各种成分的吸收，导致内源次生代谢物增加有关。

关键词 铁皮石斛；原球茎；电刺激；石斛碱；紫外分光光度法

中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）07-0114-02

Effects of Electrostimulation on Dendrobine Content in Protocorm of Dendrobium officinale

HE Qing-ying， LUO Zhi-hua， LIN Mian-jie， CHEN Jun* et al

（School of Biosciences and Biopharmaceutics， Guangdong Pharmaceutical University， Guangzhou， Guangdong 510006）

Abstract [Objective] To investigate the effects of electrostimulation on dendrobine content in protocorm of Dendrobium officinale. [Method] Protocorms were cultured by protocorm culture medium and randomly divided into two groups， the experimental group was treated with electrostimulation（25 V） while the control group did not be disposed. After 15 days incubation， dendrobine was extracted by chloroform and hot-refluxing， and determinated by ultraviolet spectrophotometry. [Result] Compared with the control group， the dendrobine content of experimental group treated with electrostimulation（25 V） for 1 h or 2 h was increased significantly（P<0.05）， while the dendrobine content was decreased（P<0.05） in experimental group treated by electrostimulation（25 V） for 3 h. [Conclusion] The electrostimulation（25 V） for 1 h or 2 h can promote the accumulation of dendrobine in protocorm， and the mechanism may be related to the changed permeability of cell， the enhanced absorption of nutrients and the increased endogenous secondary metabolites.

Key words Dendrobium officinale；Protocorm；Electrostimulation；Dendrobine；Ultraviolet spectrophotometry

鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是兰科石斛属多年生附生草本植物，具有滋阴、益胃、生津止渴、润肺止咳、强壮及增强免疫活性的作用。石斛碱作为铁皮石斛药用成分之一，具有抗肿瘤、抗衰老等作用[1-2]，但铁皮石斛中石斛碱的含量相对较少[3]，因此，通过探寻合适的方法来提高石斛碱含量具有重要的意义。

近年来，电刺激对植物生长的影响研究就一直受到关注[4-6]，潘学武等[7]研究发现微交流电刺激可使红豆杉悬浮培养细胞的紫杉醇含量提高3倍多，而脉冲电刺激处理组则提高了7～9倍。为了探究电刺激法是否可以运用于提高铁皮石斛原球茎的石斛碱含量，该研究通过使用25 V交流电对铁皮石斛原球茎进行不同时间段的刺激，并且培养15 d后，检测其石斛碱含量。

1 材料与方法

1.1 试材

铁皮石斛原球茎，购自澄思源生物科技（上海）有限公司，经鉴定为天目山铁皮石斛原球茎。……