冯华

（云蒙山合作示范牧场,四川 宣汉 636150）

改良试管凝集试验和虎红平板凝集试验检测羊布鲁氏菌病结果比较

冯华

（云蒙山合作示范牧场,四川 宣汉 636150）

虎红平板凝集试验方便、快捷，目前已广泛应用于养殖场羊布鲁氏菌病的普查，但其假阳性情况有待探究。利用改良试管凝集试验对虎红平板凝集试验检出的阳性个体进行分析，发现阳性率仅为88.8%。表明虎红平板凝集试验存在假阳性，可先用虎红平板凝集试验进行大面积普查，阳性样品再用改良试管凝集试验复核。

改良试管凝集试验；虎红平板凝集试验；布鲁氏菌病

布鲁氏菌病简称“布病”，有6个种，即马耳他布鲁氏菌（Brucellamelitensis）、流产布鲁氏菌（Br.abortus）、猪布鲁氏菌（Br.suis）、林鼠布鲁氏菌（Br.neotomae）、绵羊布鲁氏菌（Br.ovis）和狗布鲁氏菌（Br.canis）［1］。习惯上称马耳他布鲁氏菌为羊布鲁氏菌，流产布鲁氏菌为牛布鲁氏菌［2］。各个种与生物型菌株之间、形态及染色特性等方面无明显差别［3］。布鲁氏菌的抵抗力和其他不能产生芽胞的细菌相似，为细小的球杆菌、无鞭毛、有毒力的菌株［4］。流产布鲁氏菌主要宿主是牛，而羊、猴、豚鼠有一定易感性；马耳他布鲁氏菌，主要宿主是山羊和绵羊［5］，可以由羊传入牛群，也可由牛传播于牛，而其他动物对它的易感性则与流产布鲁氏菌相同［6］。检测羊布鲁氏菌病血清抗体的方法有很多种类，本试验用虎红平板凝集试验和试管凝集试验对四川省宣汉县一个规模化山羊养殖场和一个山羊养殖专业合作社的1 298份血清样品进行虎红平板凝集试验（RBPT），将虎红平板凝集试验检出阳性的358份样品再用试管凝集试验（SAT）检测对比［7］，以供广大养殖场参考。

1 材料与方法

1.1 材料

待检样品1 298份采集于四川省宣汉县李氏养殖场和专业合作社，待检血清样品放存于-20℃冰箱内。

1.2 诊断试剂

布鲁氏菌病阳性和阴性诊断血清由四川省动物疫病预防控制中心实验室提供，批号：川生药字（2014）4017451。布鲁菌虎红平板凝集试验抗原、布鲁菌改进试管凝集试验抗原同样由四川省动物疫病预防控制中心实验室提供，批号分别是20140812、川生药字（2014）4017451。微量移液器，96孔U型底微量反应板实验室自购。

1.3 方法

1.3.1 血样采集及血清制备 采血5mL，1 000 r/min离心5min，取上清液装入5mL试管置-20℃的冰箱内保存。以备检测。

1.3.2 虎红平板凝集试验（RBPT） 在洁净灭菌的平板凝集玻璃板片上标注样品编号和阴阳对照组，用移液器吸取虎红平板凝集抗原被检血清30μL滴入相应的检测点内，再用移液器分别吸被检样品30 pμL混合均匀，每吸取一个样品更换一次吸头。在20℃时反应3～5min，以阳、阴性血清对比观察结果并记录。若被检血清有颗粒状或絮状物出现均判为阳性，相反则判为阴性。

1.3.3 改良试管凝集试验（MSAT） 血清样品和标准血清分别稀释1∶200倍，各血清稀释液和1∶20倍抗原稀释液各60μL以100μL移液器加入96孔U型底微量反应板中，于平板振荡器上混匀后将反应板以密封膜密封后放置37℃温箱反应，22～24 h后取出观察试验结果。

1.3.4 标记原则 100%凝集即反应孔底部无点状白色沉淀，整个反应孔呈片状凝集，记做“#”；75%凝集即反应孔底部凝集物中稍有点状白色沉积，75°倾斜反应板时不流，记做“+++”；50%凝集即反应孔底部有明显的凝集物和点状白色沉积，75°倾斜反应板时微流，即白色沉积物不全部下流，记做“++”；25%凝集即反应孔底部有点状白色沉积，点状边缘模糊发散，75°倾斜反应板时白色沉积物几乎全流，记做“+”；不凝集即反应孔底部仅有点状白色沉积，75°倾斜反应板时白色沉积物全部下流，记做“－”。反应结果为“++”的为阳性，反应结果为“－”的为阴性。

2 检测结果

所采集1 298份羊血清样品，虎红平板凝集试验检出阳性样品358份，阳性率27.6%，其中李氏养殖场阳性率57.4%，专业合作社阳性率19.0%；利用改良试管凝集试验（MSAT）复核358份阳性样本，检出阳性样本318份，阳性率88.8%，其中李氏养殖场阳性率94.6%，专业合作社阳性率83.8%。检测结果见表1。

表1 虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测羊血清结果

3 分析与讨论

通常情况下，RBPT使用方便、快捷，适用于大面积普查，但易出现假阳性［8］。MSAT是我国布鲁氏菌病诊断的法定方法SAT的升级，既能定性，也能定量，判定容易、检测更精准，也可作为布病早期诊断，但往往因感染动物的抗体滴度达不到检测水平，不易检测出阳性，从而易造成误诊和漏诊。且MSAT特异性高，检测比较准确，但操作费工、费时［9］，不利于乡镇大面积普查。本研究发现，采用RBPT检测羊布鲁氏菌病阳性检出率27.6%；采用MSAT检测羊布鲁氏菌病358份血清样品，检测出阳性样品318份，可疑和阴性样品共40份，阳性检出率88.8%。本实验证明了用RBPT检测血清样品可能存在假阳性样品现象，说明RBPT可用于养殖场布鲁氏菌病的大面积普查的初步筛选，但不能定性定量。因此，可先用RBPT普查，阳性样品再用MSAT复核，以便作出准确的判断［10］。

［1］ 孟茹.布鲁氏菌实时荧光定量PCR检测方法与血清快速诊断试纸的初步研究［D］.新疆石河子：石河子大学，2010.

［2］ 刘凤.猪疥螨病的科学防治［J］.中国畜禽种业，2015（10）：117-118.

［3］ 姜玉娴，孙雷.应用RBPT监测布鲁氏菌病误差原因分析［J］.畜牧兽医科技信息，2009（4）：41.

［4］ 侯宝华，乔平平，党志喜.奶牛布病防制主要技术措施［J］.中国牛业科学，2010（6）：100-101.

［5］ 杨春华，邱昌庆，曹小安.流产布鲁氏菌omp25基因的克隆与原核表达［J］.中国兽医科学，2007（6）：465-468.

［6］ 王洪喆.动物布病及人间布病的预防［J］.动物保健，2006（9）：31-32.

［7］ 项爱红.常规试管凝集试验与虎红平板凝集试验检测布病抗体结果对比分析［J］.河南预防医学杂志，2016（1）：32-33.

［8］ 樊三忠，刘金彪，陈冬毅，等.虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测奶牛布鲁氏菌病的比较［J］.中国动物检疫，2009（9）：52-53.

［9］ 李锋，王莉，柴春彦，等.检测牛乳中三聚氰胺的间接竞争ELISA方法的建立［J］.中国动物检疫，2009（9）：47-48，53.

［10］李智伟，马秀敏，张跃新，等.布鲁氏菌的分子生物学诊断技术［J］.中国病原生物学杂志，2011（11）：861-864，827.

S826.7

A

2095-3887（2017）04-0069-02

10.3969/j.issn.2095-3887.2017.04.020

2017-04-26

冯华（1978-），男，兽医师，大专。研究方向：畜牧兽医。