杜新凯，任 娟，胡 珺，王常高，林建国，蔡 俊，杜 馨

(湖北工业大学 发酵工程教育部重点实验室，工业发酵湖北省协同创新中心，工业微生物湖北省重点实验室，湖北 武汉 430068)

棉铃虫甾醇载体蛋白2原核表达及纯化

杜新凯，任 娟，胡 珺，王常高，林建国，蔡 俊，杜 馨*

(湖北工业大学 发酵工程教育部重点实验室，工业发酵湖北省协同创新中心，工业微生物湖北省重点实验室，湖北 武汉 430068)

甾醇载体蛋白2(SCP-2)在昆虫体内甾醇吸收及运输过程中有着重要的生理功能。试验构建重组表达质粒pET-22b/HaSCP2，转化至E.coliBL21 (DE3)进行诱导表达，并对IPTG浓度、诱导时间及温度进行优化，经Ni柱分离纯化后分析其与胆固醇结合活性。SDS-PAGE分析表明，重组蛋白相对分子质量约为16 ku，且在25 ℃，IPTG终浓度0.2 mmol·L-1下诱导10 h为最佳诱导表达条件。经荧光探针8-苯胺-1-萘磺酸(1，8-ANS)竞争分析，胆固醇与HaSCP-2结合半数有效浓度(EC50)为29.03 μmol·L-1。该研究为深入研究棉铃虫SCP-2的功能以及后续HaSCP-2抑制剂的筛选研究奠定了基础。

棉铃虫；甾醇载体蛋白2；原核表达；原核纯化；原核优化

甾醇载体蛋白(sterol carrier protein-2，SCP-2)又称非特异性脂转运蛋白(non-specific lipidtransfer proteins，nsLTPs)，是一类碱性可溶的低分子量蛋白质，广泛存在于动物、植物、细菌、真菌中[1]。已知的含SCP-2结构域家族包括：SCP-2、SCP-x、类SCP-2(SCP-2-like)、17-β-羟基固醇脱氢酶Ⅳ (17-β-hydroxysteroid dehydrogenase-4)、短链脱氢酶(short-chain dehydrogenase) 和血红细胞膜整合蛋白(stomatin)。SCP-2主要参与胞内胆固醇、脂肪酸和脂肪酸辅酶A的吸收、转运、氧化、酯化，以及磷脂代谢和信号传递等[2-3]。与哺乳动物不同，昆虫自身不能合成类固醇，必须从食物中获取谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和麦角甾醇等植物甾醇，再转化为自身必须的胆固醇[4-5]。……