李好磊，李叶珍，赵 顾，崔腾飞，徐前明，魏建忠，李 郁，孙 裴

(安徽农业大学 动物科技学院，安徽 合肥 230036)

猪流行性腹泻病毒N基因重组真核质粒构建及其表达

李好磊，李叶珍，赵 顾，崔腾飞，徐前明，魏建忠，李 郁，孙 裴*

(安徽农业大学 动物科技学院，安徽 合肥 230036)

为探明猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus， PEDV)N基因编码的蛋白对PEDV感染早期诊断的作用，根据PEDV CV777株N基因全序列设计一对特异性引物以扩增N基因，定向插入到pPM-C-His真核表达载体中构建重组表达质粒pPM-C-His-N，将重组质粒肌肉注射昆明系小鼠，以检测其在小鼠体内的表达水平；将pPM-C-His-N转染至Vero细胞，分别在基因水平和蛋白水平对N基因的表达进行检测，并采用间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay， IFA)检测N蛋白在细胞中的表达分布情况。结果表明，重组质粒在基因水平和蛋白水平均成功表达，免疫小鼠血清中抗体的效价为1∶51 200，Western-blot结果显示，免疫血清能与重组N蛋白发生特异性反应，说明实验成功构建了重组真核表达质粒pPM-C-His-N，且在Vero细胞内检测到了绿色荧光，为PEDV诊断方法的建立及致病机制的研究奠定基础。

PEDV；N蛋白；真核质粒；表达质粒

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的一种急性、热性、高度接触性肠道传染病，以引起猪的呕吐、腹泻、脱水等为主要临床症状，哺乳仔猪、断奶仔猪和育肥猪感染发病率100%，成年母猪约为15%，哺乳仔猪受害最严重，病死率平均50%[1-2]。该病于1971年首次在英国发现，20世纪80年代初在我国陆续发生，目前PED已成为全世界流行的疾病，给世界养猪业造成巨大损失[3-5]。……