刘佳佳，陈 峰，2，覃健萍，周庆丰，鲁俊鹏，操 胜，王占新，田 野

(1．广东温氏食品集团股份有限公司，广东 云浮 527439;2．华南农业大学动物科学学院，广东 广州 510642)

禽偏肺病毒 Taqman荧光定量 PCR方法的建立及应用

刘佳佳1，陈 峰1，2，覃健萍1，周庆丰1，鲁俊鹏1，操 胜1，王占新1，田 野1

(1．广东温氏食品集团股份有限公司，广东 云浮 527439;2．华南农业大学动物科学学院，广东 广州 510642)

根据GenBank中aMPV-C P基因序列，设计出一对特异性引物和Taqman探针，建立了aMPV-CTaqman探针荧光定量PCR方法。对该反应体系进行优化，进行特异性、敏感性及重复性试验，并且建立标准曲线。结果表明，该方法只对aMPV-C检测为阳性，具有良好的特异性;能够检测到(3.63×102)拷贝数，具有良好的敏感性;建立的标准曲线斜率为-3.312，截距为44.66，相关系数为R2=0.999，循环阈值和模板拷贝数具有良好的相关性，组内及组间重复性好。采用aMPV-C Taqman探针荧光定量方法、普通PCR方法对来自广东、浙江地区25份番鸭疑似阳性aMPV-C的病料进行检测，其中前者23份阳性，后者18份阳性。这表明aMPV-C Taqman荧光定量PCR方法对样品的检测具有特异性和敏感性高的特点，更适合临床样品的检测。

C亚型番鸭偏肺病毒;荧光定量PCR;Taqman荧光探针

禽偏肺病是由禽偏肺病毒(avian metapneumovirus，aMPV)引起的急性上呼吸道感染，具有高度传染性疾病之一［1］。禽偏肺病的死亡率仅为2% ～5%，但发生细菌或者支原体等继发感染的情况下，死亡率可高达90%，对养禽业造成了严重的经济损失［2］。目前只在中国华南地区番鸭身上分离到偏肺病毒［3］。

目前，有许多实验室诊断方法，例如:病毒的分离鉴定、基因组的测定、特异性抗体的检测等［4－6］，但是这些方法的缺点是灵敏性低。……