杨晓杰 李 娜 白羽佳 翟 莹 刘丽杰 李旭业

（1齐齐哈尔大学生命科学与农林学院 黑龙江齐齐哈尔 161000 2齐齐哈尔市第一中学 黑龙江齐齐哈尔 161000 3齐齐哈尔中学 黑龙江齐齐哈尔 161000 4黑龙江省畜牧研究所 黑龙江齐齐哈尔 161005）

“观察根尖分生组织细胞的有丝分裂”实验是高中生物学教材（人教版）中必修的实验内容。该实验内容的目的是通过实验使学生进一步理解细胞有丝分裂过程的特点和变化，包括染色体的排列、形态、位置等变化规律，锻炼学生的操作、观察和思考能力；学会在显微镜下分辨有丝分裂各个不同时期的特征；训练根据镜下图像绘制有丝分裂简图的技能，培养学生认真的科学态度和实事求是的科学精神，使学生的创新思维和综合能力得到培养和提高。

但是在实际操作中，按照教材的方法和步骤，耗时长，成功率低，观察效果不理想。针对以上问题，笔者经过不断的摸索和实践，优化出行之有效的实验条件，运用该方法观察根尖细胞有丝分裂，能得到较好的分裂相。对教材中该实验方法中一些细节进行了改进和优化。

1 选材

选取大蒜，其优点是大蒜易发新根，且产生的根数量多，一头大蒜可萌发产生30～50条新根。大蒜材料易得，一年四季可选。

2 材料培养

将大蒜置于铺有脱脂棉的培养皿中，加蒸馏水或纯净水使脱脂棉保持湿润，于室温下培养，注意每日换水。大约2~3 d，可见有新根产生。使用蒸馏水或纯净水培养，后期易于染色。

3 选取根尖

当蒜头上萌发的根尖达到0.5～1 cm长时，切取前端3 mm根尖，置于固定解离液中10～12 min。在取根尖时重点看根尖的生长状态，根尖≦1 cm时，生长旺盛，根尖分裂相多。经过大量的实验摸索观察，认为取材时间不局限在某时间点，只要根尖生长状态好，从早到晚均可取材。图1中所用材料是在晚上6:30取的，分裂相很多，细胞有丝分裂指数可达到18.35%。

图1 有丝分裂各个时期（40X）

4 固定解离

解离液配制：浓盐酸∶95%酒精=1∶1，此液现用现配，盛放在培养皿中。选用浓盐酸的优点是不用配制浓度，且浓盐酸解离效果好，与95%酒精等体积混合即可。浓盐酸的作用可使细胞与细胞间的果胶层溶解，细胞间相互分离，压片时使细胞易于散开；酒精可将细胞固定，保持处理时的生活状态。笔者的操作经验是：取材的根尖越嫩，解离处理的时间越短，成熟的根尖解离时间略长，一般需要10～12 min，如果时间过短，细胞的胞间层没有溶解，细胞间不能达到相互分离，不容易压成较薄的装片，影响观察。解离时对温度没有严格的要求，一般在室温（20℃左右）即可。

5 漂洗

用滴管将培养皿里的解离液吸出去，加入蒸馏水或纯净水，冲洗3次，每次1 min。其作用是低渗处理，使细胞中的解离液渗出，洗去解离液，否则不易染色。

6 染色并加盖片

将冲洗好的根尖取出一个放在载片中央，切去伸长区后的多余部分，只留呈乳白色的生长点（约2 mm），根尖过长时，伸长区及成熟区的存在会干扰观察分生区细胞，影响观察效果。在根尖上加一滴紫药水-醋酸染色液1 min（染色液配制：紫药水∶15%冰醋酸=2∶7。市售紫药水，经济、操作方便、染色效果好。冰醋酸具有分色作用，可褪去染色质的颜色）。染色后，在根尖上加盖片。

7 压片

将4 cm×4 cm的吸水纸对折，载片放在吸水纸中，右手拇指对准盖片的位置，隔着吸水纸垂直向下稍用力按压，再用镊子背端连续轻敲使根尖呈云雾状。吸去多余的染液，拇指压片将根尖压散，轻敲的目的使细胞分散均匀，便于制成的材料处于一个平面上，利于观察。压实、敲匀是制片的关键。

8 观察

在显微镜下，先用低倍物镜观察，找到细胞分散均匀、染色体染色良好的根尖分生区，辨别有丝分裂的各个时期，转换高倍物镜进一步观察。低倍镜下视野范围大，可快速找到目标物，通过高倍物镜深入观察染色体的数目、形态等特征，易于准确辨别各个时期，见图1。观察、统计、绘图。

按照以上的实验流程，取材容易，操作简便，成本低廉，四季可行，成功率高，实验效果好。