郑树城， 王 庆， 李莹莹， 曾伟伟， 王英英， 刘 春， 石存斌

(1． 中国水产科学研究院 珠江水产研究所 农业部渔药创制重点实验室 广东省水产动物免疫技术重点实验室， 广州 510380； 2．上海海洋大学 水产与生命学院， 上海 201306)

鲤疱疹病毒3型焦磷酸测序检测方法的建立

郑树城1,2， 王 庆1， 李莹莹1， 曾伟伟1， 王英英1， 刘 春1， 石存斌1

(1． 中国水产科学研究院 珠江水产研究所 农业部渔药创制重点实验室 广东省水产动物免疫技术重点实验室， 广州 510380； 2．上海海洋大学 水产与生命学院， 上海 201306)

为了针对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3)建立一种基于焦磷酸测序技术的高通量、自动化、快速的检测方法，根据CyHV-3ORF55、ORF79和ORF92基因保守区域设计特异性PCR扩增引物和测序引物，进行PCR扩增筛选扩增效率最高的引物。PCR灵敏性和特异性试验结果显示，针对ORF79设计的引物扩增效率最高，最低检测量为100个拷贝数，且能特异性识别CyHV-3；将PCR产物进行焦磷酸测序，获得的序列经BLAST比对显示与CyHV-3-U、I、J和GZ11分离株一致性均为100%。该检测方法方便快速，适用于出入境口岸大批量样品CyHV-3诊断检测。

鲤疱疹病毒3型；锦鲤疱疹病毒；焦磷酸测序；检测

鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)，又称为锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus, KHV)、鲤鱼间质性肾炎及鳃坏死病毒(Carp interstitial nephritis and gill necrosis virus, CNGV)，是引起鲤鱼和锦鲤高度传染性锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease, KHVD)的病原[1-3]。该病一般发病于春秋季节，发病温度为18℃～28℃，患病鱼常出现食欲不振、两眼凹陷、体色发黑、腹腔和鳃出血、鳃发白、皮肤出现白色斑点、黏液分泌过多等症状[4-5]。该病自从1997年在德国首次报道以来，全球多个国家报道了由鲤疱疹病毒3型引起的鲤鱼或锦鲤大量死亡的现象[6-7]。……