刘雅琳， 周 艳， 耿盼盼， 解裕萍， 乔洪图， 孙茂盛， 李鸿钧

(中国医学科学院 北京协和医学院 医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室， 昆明 650118)

恒河猴miR-125a-3p慢病毒载体的构建、鉴定以及功能研究

刘雅琳， 周 艳， 耿盼盼， 解裕萍， 乔洪图， 孙茂盛， 李鸿钧

(中国医学科学院 北京协和医学院 医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室， 昆明 650118)

构建携带miR-125a-3p过表达与抑制表达shRNA的慢病毒，研究miR-125a-3p对轮状病毒感染乳鼠导致的腹泻的影响，为进一步研究miR-125a-3p对轮状病毒增殖过程中的影响及探究其机制提供前期研究基础。设计miR-125a-3p前体序列及其反向互补序列，与慢病毒骨架质pLVshRNA-EGFP(2A)Puro载体进行酶切连接，构建过表达与抑制表达miR-125a-3p的慢病毒表达载体。利用HEK293Ta细胞包装慢病毒颗粒，测定病毒滴度后，将获得的miR-125a-3p过表达慢病毒颗粒感染MA104细胞和灌胃感染乳鼠，检测miR-125a-3p的表达。同时对乳鼠进行轮状病毒攻毒试验，观察腹泻情况。研究成功构建了过表达及抑制miR-125a-3p表达的慢病毒载体,获得高效的过表达及抑制miR-125a-3p的慢病毒颗粒，成功感染MA104细胞，以及在乳鼠小肠组织有表达。同时发现miR-125a-3p过表达慢病毒感染乳鼠后对轮状病毒引起的腹泻有明显的抑制作用。

miR-125a-3p；慢病毒；过表达载体；抑制表达载体；乳鼠

MicroRNA(miRNAs)是一类长度约为22个碱基的非编码小RNA，它们通过抑制翻译和导致mRNA降解两种方式在转录后水平调控真核生物三分之一以上基因的表达，参与了细胞的分化发育、增殖、凋亡和代谢等几乎所有生物过程[1-2]。……