石培欣　马金龙　黄广森

摘要：从大连海域海泥样品中筛选获得的产碱性蛋白酶的海洋细菌入手，选用司班、吐温-80、硬脂酸、羟甲基纤维素钠4种表面活性剂，采用摇瓶发酵，福林酚显色法测粗酶活性，初步确定其中司班-80为最适袁面活性剂，司班用量为0.625%时，酶活性为169.8U/mL。设计正交实验，优化发酵条件，用L9（33）正交表，利用SPSS13.0软件处理数据得到最优工艺——培养温度33℃，培养基pH8.0，培养时间48h。可用于后续发酵产酶研究。

关键词：碱性蛋白酶；表面活性剂；筛选

碱性蛋白酶（Alkalineprotease）是指pH值偏堿性范围内水解蛋白质肽键的酶类，1913年Rohm首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用，1945年瑞士Dr.Jaag等人在地衣芽孢杆菌（Bacillus lichenfformis C）中发现了碱性蛋白酶。有数据显示，全世界工业用酶每年销售额大约为1亿美元，在所有的工业用酶制剂中75%是蛋白水解酶，而蛋白酶是工业用酶中占据比例最大的酶类，大约占全世界每年总销售量的60%左右。碱性蛋白酶在食品、洗涤及制革等行业中有着广泛的用途。因此，碱性蛋白酶研究成为蛋白酶研究的热点。

本文是基于大连海域得到的高产碱性蛋白酶的菌株，采取非基因变异方法，通过添加表面活性剂改变细胞膜（壁）通透性，提高细菌产酶能力，初步探求所筛选海洋菌的工业应用价值，有重要的理论和实际意义。

1材料与仪器

1.1材料

1.1.1菌种：大连海域产碱性蛋白酶芽孢杆菌，筛选自大连海域采集的海泥样品中筛选能产碱性蛋白酶的海洋细菌DL12，由本实验室保存。

1.1.2培养基及其配方：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3.0g/L、蛋白胨10.0g/L、NaCl 5.0g/L、琼脂15.0g/L，pH值7.4～7.6。……