张卫凯，胡志远，李智涛

·基础医学·

基于柔性微电极芯片活体电穿孔提高PD-1质粒DNA转染效率

张卫凯1，胡志远2，李智涛1

目的 开发一种柔性微电极芯片提高以PD-1质粒为模版的DNA转染效率。方法 运用微机电系统加工柔性衬底的微电极芯片，在体外对HEK293细胞进行电转染GFP质粒，验证柔性微电极芯片的可靠性。在活体动物进行电穿孔转染PD-1质粒实验，BALB/C小鼠共分3组，每组5只，分别给予0 V·cm-2, 100 V·cm-2, 200 V·cm-2不同电场强度进行电穿孔，间接ELISA法检测电转后不同时间点的血清中抗PD-1抗体滴度。结果制备的柔性微电极芯片，能够转染GFP质粒到HEK293细胞内表达蛋白；在活体实验中，采用微电极芯片电穿孔免疫5次后2周，小鼠血清中PD-1抗体达到峰值。结论 基于柔性微电极芯片的活体电穿孔能够有效提高DNA转染效率，增强免疫应答。

电穿孔；DNA转染；PD-1

程序性死亡分子1 (programmed death-1,PD-1)又称CD279，是一种表达于T细胞膜表面的负性免疫共刺激分子[1]。正常机体内，组织细胞表面的PD-1配体(programmed death-ligand 1,PD-L1)与淋巴细胞表面的PD-1结合，抑制淋巴细胞活化，诱导活化的淋巴细胞凋亡，从而在自身免疫耐受的形成以及防止自身免疫疾病中发挥重要作用。许多肿瘤细胞表面高表达 PD-L1，抑制局部T淋巴细胞功能而使肿瘤细胞逃避机体免疫监视[2-3]。通过对PD-1/PD-L1信号通路进行阻断，可有效提高T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤效果[4-5]。目前，在肺癌、淋巴瘤等疾病的临床免疫治疗中应用PD-1单克隆抗体取得显著的疗效[6-9]。传统方法采用原核细胞表达重组蛋白作为免疫原，由于缺乏糖基化修饰及正确的空间构象，严重影响中和活性抗体的产生。……