赵 欢

(西华师范大学 生命科学学院，四川 南充 637009)

掌叶半夏凝集素基因的克隆及亚细胞定位分析

赵 欢

(西华师范大学 生命科学学院，四川 南充 637009)

为了克隆掌叶半夏凝集素基因(Pinelliapedatisectaagglutinin，PPA)，并对其进行生物信息学分析和亚细胞定位。采用PCR技术扩增掌叶半夏凝集素基因的ORF序列，构建pCAMBIA1300-35S-PPA-eGFP重组载体，导入农杆菌GV3101并在烟草中进行瞬时表达，采用激光扫描共聚焦显微镜观察其亚细胞定位。克隆获得的PPA基因全长由777个核苷酸组成，编码258个氨基酸，含有3个甘露糖结合位点和2个保守的B-lectin结构域，GenBank登录号为KF154981，氨基酸序列登录号为AGV40779。序列比对表明，该序列与天南星、滴水珠、花南星和半夏凝集素的氨基酸序列相似性分别为96%，91%，86%和83%。亚细胞定位的结果表明，pCAMBIA1300-35S-PPA-eGFP融合蛋白在细胞核内无分布，而是点状分布在细胞质膜上。为进一步解析掌叶半夏凝集素基因的结构与功能，开展掌叶半夏凝集素抗病虫害机制的研究奠定基础。

掌叶半夏；掌叶半夏凝集素；基因克隆；亚细胞定位

植物凝集素是一类非酶和非免疫起源的植物蛋白，含有至少一个非催化结构域且能可逆结合到特异糖及糖复合物[1]。自Herman Stillmark在蓖麻籽中发现蓖麻毒蛋白(Ricin)以来，现已从豆科、兰科、茄科、葱科、大戟科、百合科、禾本科、石蒜科、天南星科等植物中分离获得了1 000多种植物凝集素[2]。Van Danme等[3-4]根据氨基酸序列的同源性及其在进化上的关系，将植物凝集素分为7个基因家族，分别为豆科凝集素(The legume lectins)、含Hevein结构域的壳多糖结合蛋白(The chitin binding lectins composed of hevein domains)、Ⅱ型核糖体失……