曹滕飞，丛明，李兆艳，赵建民，吕家森，李成华

1. 宁波大学海洋学院，宁波 3152112. 中国科学院烟台海岸带研究所，烟台 2640033. 烟台大学生命学院，烟台 264005

氨态氮对菲律宾蛤仔毒理机制研究的内参基因筛选

曹滕飞1，丛明2,，李兆艳3，赵建民2，吕家森3，李成华1

1. 宁波大学海洋学院，宁波 3152112. 中国科学院烟台海岸带研究所，烟台 2640033. 烟台大学生命学院，烟台 264005

为了准确和系统地分析NH3-N对菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)毒性的分子机制，并对相关基因的转录组学数据进行验证，利用geNorm和Normfinder这2种软件，以暴露30 d中不同时间点的鳃组织cDNA为模板，从18S rRNA (18S)、beta-actin (Actin)、beta-tubulin (Tubu)、elongation factor 1-alpha (EF1α)、cyclophilin A (CyPA)、Ubiquitin (Ub)等6个备选管家基因中，筛选可以稳定表达的内参基因，作为转录组学分析的内参基因。以稀释50倍的鳃组织cDNA模板作为检测模板，geNorm软件分析获得6对备选内参基因的表达稳定性依次为：EF1α>CyPA>Actin>Tubu>Ub>18S，较优内参为EF1α和CyPA；NormFinder软件分析获得6对备选内参基因的表达稳定性为：EF1α>Actin>Tubu>CyPA>Ub>18S，最优内参基因为EF1α。为了验证上述筛选结果，分别以EF1α和CyPA作为内参基因研究unigene1的表达趋势，发现以EF1α为内参基因时，unigene1的qRT-PCR的表达趋势与其转录组表达倍数的变化趋势一致。因此确定NH3-N暴露菲律宾蛤仔后，鳃组织中表达最为稳定的内参基因为EF1α。

氨氮；菲律宾蛤仔；内参基因

海岸带是人类聚居的主要地带之一，工业相对发达，人口也比较密集，工业和生活废物给近岸海洋环境带来很大的生态污染压力。2010—2015年“中国近岸海域环境质量公报”公布的数据显示，我国近岸局部海域海水环境污染情况比较严峻，无机氮一直都是首要的超标因子，而近岸海水中超过Ⅲ类标准限值的无机氮主要是氨氮[1-3]。2010年入海河流水……