李深誉 阳永东 黄蕃俊 陈 前 罗朗昭 严 峻

(桂林医学院第二附属医院神经外科，广西 桂林 541000)

垂体腺瘤组织缺氧诱导因子-1α、白细胞分化抗原147表达及其与血管内皮生长因子的关系

李深誉 阳永东 黄蕃俊 陈 前 罗朗昭 严 峻

(桂林医学院第二附属医院神经外科，广西 桂林 541000)

目的 检测垂体腺瘤中缺氧诱导因子(HIF)-1α和白细胞分化抗原(CD)147的表达，关注二者与血管内皮生长因子(VEGF)的相关性。方法 经病理确诊的垂体腺瘤手术患者48例为观察组，6例尸检中留取的垂体(腺垂体)为对照组，均留取术后石蜡包埋组织。应用免疫组化方法检测两组HIF-1α、CD147和VEGF的表达。结果 观察组HIF-1α、CD147和VEGF表达的阳性率明显高于对照组(均P<0.05)，观察组HIF-1α、CD147和VEGF的表达与是否为侵袭性垂体腺瘤、Ki67的表达密切相关(均P<0.05)，而三者均与是否为功能性的腺瘤无关(均P>0.05)。线性相关分析显示观察组HIF-1α、CD147和VEGF的表达呈正相关。结论 垂体腺瘤中HIF-1α、CD147和VEGF表达升高可能与肿瘤侵袭性生长有关。HIF-1α、CD147均与VEGF有一定的协同作用。

垂体腺瘤；缺氧诱导因子-1α；白细胞分化抗原147；血管内皮生长因子

垂体腺瘤是鞍区最常见的肿瘤，部分肿瘤在生长过程中可表现为侵袭性，手术较难完全切除，术后复发率高〔1〕。研究认为垂体腺瘤的间质富于血管〔2〕。缺氧诱导因子(HIF)-1α在局部组织缺氧时产生，对肿瘤的侵袭、转移及血管生成均有重要促进作用〔3〕。白细胞分化抗原(CD)147是跨膜糖蛋白的一种，在肿瘤组织中表达升高，可以引起肿瘤细胞增殖，同时其对血管生成可能有一定作用〔4〕。本研究检测垂体腺瘤中HIF-1α、CD147的表达，关注二者与血管内皮生长因子(VEGF)的关系，分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年1月至2016年2月桂林医学院第二附属医院进行手术治疗并经病理证实为垂体腺瘤患者48例为观察组，其中男23例，女25例，年龄40～76(平均58.6)岁。均符合世界卫生组织(WHO)中的诊断标准，患者临床资料完整。其中侵袭性20例，非侵袭性28例。术前均行内分泌学检查及术后免疫组化检查分型，其中无功能型18例，有功能型30例(泌乳素腺瘤7例，生长激素腺瘤6例，卵泡刺激素腺瘤5例，促皮质激素腺瘤4例，促甲状腺激素腺瘤3例，混合性腺瘤5例)。术前均未进行任何放、化疗。6例尸检中检取的垂体(腺垂体)作为对照组，其中男3例，女3例，年龄45～64(平均51.3)岁。两组性别、年龄无显著差异(P>0.05)。

1.2 两组HIF-1α、CD147和VEGF的检测 组织常规取材后均应用石蜡包埋、切片，HIF-1α、CD147和VEGF的检测应用免疫组化SP法，二氨基联苯胺(DAB)显色，按说明书进行操作，做好质控工作。

1.3 HIF-1α、CD147和VEGF的判定 HIF-1α、CD147和VEGF的表达部位均为细胞质，以细胞质中出现棕黄色颗粒样物质为阳性反应细胞。在低倍镜下染色较为典型区域进行观察，然后选择5个400倍视野进行计数，取平均值，以阳性细胞≤5%为阴性，>5%为阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行χ2检验及Pearson相关性分析。

2 结 果

2.1 两组HIF-1α、CD147和VEGF阳性率比较 对照组HIF-1α、CD147均无表达。观察组HIF-1α、CD147和VEGF阳性率明显高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组HIF-1α、CD147和VEGF阳性率比较〔n(%)〕

2.2 观察组不同临床特征中HIF-1α、CD147和VEGF阳性率比较 观察组HIF-1α、CD147和VEGF表达与侵袭性垂体腺瘤、Ki67的表达密切相关(均P<0.05)，而与是否为功能性腺瘤无关(均P>0.05)。见表2。

表2 观察组不同临床特征中HIF-1α、 CD147和VEGF阳性率的比较〔n(%)〕

2.3 观察组HIF-1α、CD147和VEGF表达的相关性 观察组HIF-1α和VEGF呈正相关(r=0.49,P=0.030 6)，CD147和VEGF呈正相关(r=0.46,P=0.042 3)。

3 讨 论

垂体腺瘤是发生在蝶鞍的肿瘤，主要来源于腺垂体细胞。部分患者表现为侵袭性生物学行为，通常指突破包膜生长并侵犯邻近结构的垂体腺瘤，常向鞍外生长，侵犯邻近硬膜、颅骨、海绵窦和包绕颈内动脉。此种患者手术时的风险较高，术后复发率高〔5,6〕。垂体腺瘤形成过程涉及细胞增殖、血管生成的各个环节〔7〕。本研究结果提示HIF-1α、CD147和VEGF三种蛋白高表达是促进垂体腺瘤形成的重要促进因素，三者高表达时肿瘤呈侵袭性的状态。三者高表达可以在一定程度上促进肿瘤细胞的增殖，这与三者均为肿瘤促进基因的特征性一致。HIF-1α、CD147均可以在一定程度上促进VEGF的表达，进而促进肿瘤间质的血管生成。HIF-1是由 HIF-1α 和 HIF-1β亚单位形成的异源性的二聚体，HIF-1α亚基是其活性单位， 与内环境中的低氧有关，也被称为缺氧状态时“缺氧基因表达的总开关”， HIF-1α可以对下游多个基因进行有效的调控，并与缺氧相关的反应结构域结合，诱发细胞的低氧反应，启动靶基因的转录〔8,9〕。HIF-1α 可以促进间质血管的生成步骤：①血管发生阶段：HIF-1α能通过合成一氧化氮引起血管扩张及增加血管壁的通透性；②进展阶段：HIF-1α通过上调基质金属蛋白酶进而诱导血管内皮细胞的增殖和迁移，形成出芽状的新生血管；③形成阶段：在 VEGF等血管生成因子的作用下，血管内皮细胞相互吻合成具有功能的血管腔，进而形成血管网；④塑形和改建阶段：通过血小板生长因子等使血管平滑肌或其他细胞迁移包绕新生血管，同时形成基质，完善血管壁的功能〔10,11〕。而CD147在肿瘤形成中也具有促进作用，CD147包括细胞外N端2个C2型免疫球蛋白区、24个氨基酸残基组成的跨膜区和C端39个氨基酸残基组成的胞内区，相对分子量为58 kD，能和其他跨膜蛋白进行有效结合后形成复合物〔12,13〕。而CD147的胞内段在不同种属中的保守程度非常高，其作为信号转导的调节作用较强〔14〕。也有研究认为表皮生长因子受体中酪氨酸蛋白激酶启动后可以诱导 CD147的表达〔15,16〕。 CD147表达的改变在RNA和蛋白质两种水平上影响VEGF的产生，在体内实验中，过表达CD147能刺激肿瘤血管生成和肿瘤生长，用反义RNA抑制 CD147表达，则二者都被抑制〔17〕。HIF-1α、CD147对间质血管生成的作用主要是通过诱导VEGF表达实现的。

1 Xie W,Wang H,He Y,etal.CDK5 and its activator P35 in normal pituitary and in pituitary adenomas:relationship to VEGF expression〔J〕.Int J Biol Sci,2014;10(2):192-9.

2 Cristina C,Perez-Millan MI,Luque G,etal.VEGF and CD31 association in pituitary adenomas〔J〕.Endoc Pathol,2010;21(3):154-60.

3 Luczak MW,Roszak A,Pawlik P,etal.Increased expression of HIF-1A and its implication in the hypoxia pathway in primary advanced uterine cervical carcinoma〔J〕.Oncol Reports,2011;26(5):1259-64.

4 杨新杰,雷德林,张 圃,等.CD147和MMP-2、VEGF在腺样囊性癌侵袭转移中的作用〔J〕.实用口腔医学杂志,2009;25(3):372-6.

5 Liu F,Wang XY,Liu YS.Expression of VEGF,bFGF,Endostatin and angiogenesis of pituitary adenoma〔J〕.J Clin Res,2006;23(8):1172-4.

6 Yamada S,Takada K.Angiogenesis in pituitary adenomas〔J〕.Microscopy Res Tech,2003;60(2):236-43.

7 冯广才,张新定,周旺宁,等.FHIT、CD147和MVD的表达与垂体腺瘤复发的关系〔J〕.中国临床神经外科杂志,2008;13(6):332-4.

8 Wan L,Huang J,Chen J,etal.Expression and significance of FOXP1,HIF-1α and VEGF in renal clear cell carcinoma〔J〕.J Balkan Union Oncol,2015;20(1):188-95.

9 Wu XH,Lu YF,Hu XD,etal.Expression of hypoxia inducible factor-1 alpha and its significance in laryngeal carcinoma〔J〕.J Int Med Res,2010;38(6):2040-6.

10 Zagouri F,Sergentanis TN,Gazouli M,etal.HSP 90,HSPA 8,HIF-1 alpha and HSP 70-2 polymorphisms in breast cancer:a case-control study〔J〕.Molec Biol Reports,2012;39(12):10873-9.

11 邹多宏,黄远亮.低氧诱导因子-1α的研究进展〔J〕.国际口腔医学杂志,2010;37(3):320-2.

12 张 慧,郭永川,钟艳平.垂体腺瘤中CD147、LN-R基因蛋白的表达与侵袭性的关系〔J〕.中国实验诊断学,2009;13(6):776-8.

13 黎 明,章振保,林炳森,等.CD147与VEGF在人膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义〔J〕.医学临床研究,2007;24(4):604-6.

14 曲 鑫,曲元明,张泽香,等.CD147、MMP-9和VEGF在垂体瘤中的表达及与其生物学行为的关系〔J〕.山东大学学报(医学版),2008;46(3):288-91.

15 张 振,管海方,朱文彬,等.CD147与MMPs、VEGF在肿瘤发生发展中相互作用的研究进展〔J〕.现代生物医学进展,2014;14(24):4798-800.

16 Ke X,Fei F,Chen Y,etal.Hypoxia upregulates CD147 through a combined effect of HIF-1α and Sp1 to promote glycolysis and tumor progression in epithelial solid tumors〔J〕.Carcinogenesis,2012;33(8):1598-607.

17 Tang Y,Nakada MT,Kesavan P,etal.Extracellular matrix metalloproteinase inducer stimulates tumor angiogenesis by elevating vascular endothelial cell growth factor and matrix metalloproteinases〔J〕.Cancer Res,2005;65(8):3193-9.

〔2017-03-16修回〕

(编辑 苑云杰)

2014年度广西急诊与医学求援人才课题资历项目(No.GXJZ201422)；2016年度广西医药卫生自筹经费计划课题项目(No.Z2016037)

严 峻(1978-)，男，博士，副主任医师，主要从事神经外科研究。

李深誉(1984-)，男，硕士，主治医师，主要从事神经外科研究。

R739

A

1005-9202(2017)11-2747-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.11.065