张多多郑菲罗会颖李中媛罗学刚

（1. 工业发酵微生物教育部重点实验室 天津市工业微生物重点实验室 天津科技大学生物工程学院，天津 300457；2中国农业科学院饲料研究所，北京 100081；3北京林业大学生物科学与生物技术学院，北京 100083）

嗜热子囊菌JCM12803的α-半乳糖苷酶基因tcgal27A在毕赤酵母中的表达

张多多1郑菲2，3罗会颖2李中媛1罗学刚1

（1. 工业发酵微生物教育部重点实验室 天津市工业微生物重点实验室 天津科技大学生物工程学院，天津 300457；2中国农业科学院饲料研究所，北京 100081；3北京林业大学生物科学与生物技术学院，北京 100083）

从嗜热子囊菌（Thermoascus crustaceus）JCM12803克隆α-半乳糖苷酶基因，并对其酶学性质进行系统的研究，旨为获得工业应用性质优良的α-半乳糖苷酶。通过RT-PCR方法从T. crustaceus JCM12803中克隆α-半乳糖苷酶基因序列，并对其酶学性质进行了系统的分析。结果显示，tcgal27A属于糖苷水解酶27家族，基因全长1 918 bp，含有4个内含子，cDNA全长1 419 bp，编码472个氨基酸，预测tcgal27A N端含有24个氨基酸为其可能的信号肽。将TCGal27A在毕赤酵母中成功地进行了表达，所获得的重组TCGal27A具有高比活（336.5 U/mg）及宽泛的底物特异性，对蜜二糖（14.4 U/mg）、棉子糖（9.1 U/mg）、角豆胶（3.6 U/ mg）、魔芋粉（1.6 U/mg）、瓜尔豆胶（1.3 U/mg）、水苏糖（0.7 U/mg）都有着不同程度的降解作用。以pNPG为底物时的Km值为1.6 mol/mL，Vmax为536.8 μmoL/（min·mg）。TCGal27A的最适作用pH为4.5，最适温度为65℃，50℃处理1 h之后酶活力还能保持86.0%。这些结果表明耐高温TCGal27A性质优良，可添加到饲料中，在消化和提高豆粕蛋白能量利用率方面有良好的潜在应用价值。

嗜热真菌；α-半乳糖苷酶；热稳定性；异源表达

α-半乳糖苷酶又称蜜二糖酶，可特异性水解底物中的α-1，6-半乳糖苷键，释放出末端的半乳糖残基。……