刘红，孙伟，顾刘宝

（1.武汉市第一医院武汉430022；2.江苏省中医院南京中医药大学附属医院南京210029；3.江苏省省级机关医院江苏省老年医学研究所南京210024）

大黄素诱导自噬改善顺铂导致肾小管细胞损伤机制探索＊

刘红1，孙伟2＊＊，顾刘宝3

（1.武汉市第一医院武汉430022；2.江苏省中医院南京中医药大学附属医院南京210029；3.江苏省省级机关医院江苏省老年医学研究所南京210024）

目的：观察大黄素对顺铂所致的肾小管上皮细胞（NRK-52E）损伤的影响，探讨其可能分子调节机制。方法：观察大黄素对顺铂所致NRK-52E细胞形态学改变的影响；采用Western Blot方法检测顺铂单独处理和加入大黄素共同处理细胞后，凋亡相关蛋白Caspase-3和cleaved Caspase-3的表达情况；用大黄素干预细胞不同的时间点，观察微管相关蛋白1轻链3（LC3）II/I的表达和pmRFP-LC3质粒转染细胞后荧光颗粒的变化情况，同时观察雷帕霉素处理细胞不同时间点后LC3-II/I的表达情况及其对顺铂环境下细胞形态学改变的影响，并观察大黄素对自噬上游通路AMPK的活化和mTOR信号的影响。结果：顺铂可以诱导NRK-52E细胞出现形态学改变，大黄素能够改善顺铂导致的变化。另外，大黄素干预可以下调顺铂导致的cleaved Caspase-3蛋白表达的增多；大黄素处理细胞不同时间点LC3-II/LC3-I的比值明显上升，pmRFP-LC3转染观察到大黄素处理细胞后自噬颗粒明显增多。同时雷帕霉素处理细胞后LC3-II/LC3-I的比值明显上升，其与顺铂共同干预能明显改善顺铂诱导的细胞凋亡；大黄素干预时间的延长，p-mTOR蛋白表达明显下调，p-AMPK的表达明显上调。结论：大黄素可以改善顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡，其作用机制可能是通过调节AMPK/mTOR信号通路诱导自噬来发挥肾保护作用。……