张中华，刘效栓，王红丽

(甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050)

·实验研究·

炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的实验研究

张中华，刘效栓，王红丽

(甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050)

目的：探讨炮制与超微粉碎技术对水蛭药效的影响。方法：①采用BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定生、制水蛭超微散粒度。②将50只小鼠随机分为正常对照组、生水蛭水煎剂组、生水蛭普通散组、生水蛭超微散组、制水蛭超微散组5组，每组10只；生水蛭水煎剂组以0.4 mg/g体质量灌胃;3个散剂组临时配成13 g/L混悬液，以0.2 mg/g体质量灌胃;正常对照组以13 g/L生理盐水灌胃，均1 d 3次，连续3 d。第4天灌胃1 h后，自小鼠眼内眦球后静脉丛取血，采用毛细管法测定小鼠的凝血时间，另采用剪尾法测定小鼠剪尾5 mm出血时间。结果：制水蛭超微散药效最强，其次为生水蛭超微散，后依次为生水蛭散、水煎剂。结论：超微粉碎水蛭，特别是采用新法炮制后再行超微粉碎操作，可使药物口感、气味明显改善，药效提高。

炮制；超微粉碎；水蛭/药效学；凝血时间；出血时间；动物；小鼠

水蛭是一种临床常用的破血逐瘀中药[1]，按新方法制成的制水蛭在使原药气味改善的同时，内在成分也得到较好保存，且改善微循环、抗凝血、降低血小板聚集率等均较传统烫制水蛭占优势，部分指标具保质增效趋势，也优于生水蛭[2]；但水蛭入汤剂易反胃败胃，味劣难服，临床中也有装胶囊吞服或研末吞服效优的报道[3]。随着现阶段超微粉碎技术研究的进步，药物粒度有所减小，气味和服用口感得到明显改善。鉴于超微粉碎和炮制水蛭药效优势对比报道尚少，本实验采用BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定生、制水蛭超微散粒度，并观察其对小鼠抗血栓、抗凝血作用的影响，探讨炮制与超微粉碎对水蛭药效的影响。

1 材 料

1.1 动 物

SPF级健康雄性昆明种小鼠，体质量平均(28±3) g，由甘肃中医药大学实验动物中心提供，实验许可证号：SCXK(甘)2011-0002。

1.2 仪 器

BT-1500型离心沉降式粒度分布仪，北京中仪科信科技有限公司产品；BFM-6型倍力微粉机，济南倍力粉技术工程有限公司产品。

1.3 药品的制备

水蛭为宽体金线蛭，由甘肃省中医院药剂科提供。

1.3.1 水蛭丝的制备

将混杂在原药材中的杂质细致挑除，擦净，取湿纱布予以覆盖，稍润后切丝(宽度为2～3 mm)。在切制过程中发现部分药材有白色结晶性粉末于药材中间填充，无咸、涩味，初步认定为石膏。待水蛭切丝晾干后过筛处理，石膏可大部分脱落。将水蛭丝置于紫外线灯下照射45 min，装瓶密闭待用。

1.3.2 生水蛭水煎液的制备

取2.6 g水蛭丝，加入10倍量水，浸泡30 min，轻微煮沸30 min，过滤；取8倍量水加入药渣，轻微煮沸30 min，过滤；将两次所得滤液合并，并按100 mL 定容，质量分数设置为26 g/L。

1.3.3 生水蛭普通散的制备

粉碎研磨净水蛭丝，过100目筛。

1.3.4 生水蛭超微散的制备

采用BFM-6型倍力微粉机将净水蛭丝粉碎，设置出料温度为35～40 ℃。

1.3.5 制水蛭超微散的制备

采用酒润麸制对净水蛭丝炮制，采用BFM-6型倍力微粉机粉碎，设置出料温度为35～40 ℃。

分别将上述生水蛭普通散、生水蛭超微散、制水蛭超微散薄层平铺，放置于紫外线灯下，照射45 min，保存待用。

2 方法与结果

2.1 统计学方法

2.2 水蛭超微散粒度的测定

参考《中国药典》[4]相关规定。水蛭普通散的粒度平均为(150±6)μm。经BT-1500型离心沉降式粒度分布仪对生、制水蛭超微散粒度测定，结果显示：经BFM-6型倍力微粉机粉碎，生水蛭粒径可达10.24 μm，制水蛭粒径可达7.97 μm；生、制水蛭的最大粒径依次是72 μm和24.81 μm，两者的50%粒度依次是<10 μm、< 8 μm，两者的90%粒度依次是<50 μm、<23 μm,可达超微成效。经新法行炮制操作后，可为粉碎创造条件，较生水蛭，其粒度呈较小显示。

2.3 各组小鼠凝血时间对比

将50只小鼠随机分为正常对照组、生水蛭水煎剂组、生水蛭普通散组、生水蛭超微散组、制水蛭超微散组5组，每组10只。生水蛭水煎剂组以0.4 mg/g 体质量灌胃;3个散剂组临时配成13 g/L混悬液，以0.2 mg/g体质量灌胃;正常对照组以13 g/L 生理盐水灌胃。均1 d 3次，连续3 d。第4天灌胃1 h后，自小鼠眼内眦球后静脉丛取血，采用毛细管法测定各组小鼠的凝血时间。结果见表1。水蛭粉碎抗凝效果优于水煎剂，超微散抗凝效果优于普通散，制水蛭超微散抗凝效果优于生水蛭，差别有统计学意义(P<0.05)。结果表明：水蛭以超微粉碎和新法炮制后，抗凝活性增强。

组 别剂量/(mg·g-1)凝血时间/min正常对照组0.42.97±1.42生水蛭水煎剂组0.44.94±2.33*▲△★生水蛭普通散组0.26.24±2.72*#△★生水蛭超微散组0.28.35±2.61*#▲★制水蛭超微散组0.210.37±2.18*#▲△

注：与正常对照组对比，*P<0.05；与生水蛭水煎剂组对比，#P<0.05；与生水蛭普通散组对比，▲P<0.05；与生水蛭超微散组对比，△P<0.05；与制水蛭超微散组对比，★P<0.05。

2.4 各组小鼠出血时间对比

动物分组、给药剂量同2.3。灌胃3 d，1 d 2次。第4天灌胃1 h后，采用剪尾法，测定各组小鼠剪尾5 mm出血时间，结果见表2。水蛭粉碎出血时间长于水煎剂，超微散出血时间长于优于普通散，制水蛭超微散出血时间长于优于生水蛭，差别有统计学意义(P<0.05)。结果表明：水蛭以超微粉碎和新法炮制后，可延长出血时间。

组 别剂量/(mg·g-1)出血时间/min正常对照组0.47.93±2.57生水蛭水煎剂组0.410.29±3.20*▲△★生水蛭普通散组0.212.31±4.09*#△★生水蛭超微散组0.215.41±5.08*#▲★制水蛭超微散组0.217.44±4.56*#▲△

注：与正常对照组对比，*P<0.05；与生水蛭水煎剂组对比，#P<0.05；与生水蛭普通散组对比，▲P<0.05；与生水蛭超微散组对比，△P<0.05；与制水蛭超微散组对比，★P<0.05。

3 讨 论

水蛭丝入药，除方便煎出药物成分外，还有利于去除水蛭体内人为掺入的杂质，较《中国药典》切段入药效果更佳。超微粉碎生水蛭，50%的粒度为1/15普通散，90%的粒度为1/4普通散，且质地细腻，腥味减弱，色变浅，便于吞服[5]。应用1/2煎剂剂量，相较水煎剂，有更佳的抗凝血效果，表明超微技术明显增强了水蛭药效[6]。

采用新法对水蛭炮制后，为其气味矫正创造了条件，超微粉碎后其粒度较生水蛭小得多，最大粒径仅24 μm，为生水蛭超微粉的1/3[7]。在3种散剂中，制水蛭超微散组药效指标最优，有较高的推广、应用价值。虽药物粒度减小，为溶解吸入、气味口感改善创造了条件，但也会使稳定性和表面能发生变化；因此制水蛭超微粉的最佳粒度范围及稳定性等问题，还需深入研究[8]。

[1]吕文海,邱福军,王作明.炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究[J].中国中药杂志,2001,26(4):241-243.

[2]李冰宁.中药水蛭鲜品、生品与炮制品的化学成分及药理活性的差异性研究[D].北京:北京林业大学,2010.

[3]单宇,张伽妹,丁月珠,等.水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性[J].中国中药杂志,2016,41(10):1843-1848.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010:77

[5]耿亚.中药水蛭的药理药效及临床药用价值研究[J]. 中国医药指南,2013,9(16):685-686.

[6]王雨林,王实强,刘玉琴,等.不同炮制方法对水蛭中氨基酸及抗凝血酶活性的影响[J].湖南中医药大学学报,2013,33(11):42-45.

[7]朱华明,付廷明,郭立玮,等.水蛭的湿法超微粉碎提取及其工艺优化[J].中草药,2013,44(15):2079-2084.

[8]张玉娟，李兆明，田景振. 注射用水蛭低肽冻干粉针剂药效学研究[J].药学研究,2013,32(2):77-79.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2017)03-0073-03

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B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.03.33

2016-09-22；

2017-02-06