曾 理，唐泽飞，李春鸣

(遵义医学院附属医院 病理科，贵州 遵义 563099)

临床医学研究

重组腺病毒pCMV-NM23-IRES-EGFP载体的构建及鉴定

曾 理，唐泽飞，李春鸣

(遵义医学院附属医院 病理科，贵州 遵义 563099)

目的 构建携带有NM23的重组腺病毒载体并观察其对人胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响。方法 以质粒NM23-PIRES2-EGFP为模版，采用PCR扩增NM23基因，克隆至腺病毒载体pCMV-MCS-IRES-EGFP上，形成重组腺病毒载体pCMV-NM23-IRES-EGFP并酶切鉴定及基因测序。将人胃癌细胞株BGC-823分为实验组(NM23-OE组，感染pCMV-NM23-IRES-EGFP)、空白组(Ctrl组)，阴性对照组(NC组，感染pCMV-MCS-IRES-EGFP)；Real Time PCR和Western Blot分别检测3组细胞中NM23mRNA和蛋白表达；流式细胞仪检测3组细胞凋亡率。结果 经酶切鉴定和基因测序证实成功构建重组腺病毒pCMV-NM23-IRES-EGFP；经扩增后，重组腺病毒的滴度为4.0×1010ifu/mL ；RT-PCR及Western blot结果显示，阴性对照组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05)，而实验组的NM23的mRNA和蛋白表达显著高于其他两组(P<0.05)；实验组BGC-823细胞的凋亡率也显著高于其他两组(P<0.05)。结论 成功构建了过表达NM23的重组腺病毒pCMV-NM23-IRES-EGFP载体，通过上调NM23基因的表达，可观察到胃癌细胞株BGC-823的凋亡水平有明显升高，为后续研究NM23基因对人胃腺癌细胞生物学功能的影响提供实验基础。

NM23；载体；BGC-823；腺病毒；凋亡

NM23基因最早发现于1988年，是由美国国立癌症研究所的Steeg等[1]用消减杂交分离的方法从7个K-1735小鼠黑色素瘤细胞株中分离出来并克隆成功。作为第一个被发现的肿瘤转移抑制基因，NM23基因在多种肿瘤细胞中呈现低表达或不表达[2-3]，而这种表达的缺失对肿瘤的浸润转移起重要作用。Radovic等[4]研究发现，与正常胃黏膜相比NM23基因在胃腺上皮细胞癌中呈现低表达。孙端[5]发现胃癌组织中NM23基因表达的缺失可导致临床TMN分期的加重。

作为目前应用最为广泛的载体之一，腺病毒载体具有宿主范围广、感染率高、安全性好等诸多优点[6]。本实验采用AdMax系统的第三代腺病毒，通过构建携带NM23基因的重组腺病毒载体并感染人胃癌细胞株BGC-823，从而获得稳定过表达NM23基因的人胃癌细胞株BGC-823，为后续研究NM23基因对人胃腺癌细胞生物学功能的影响提供实验基础。