杨晓寰

(汕头大学医学院第一附属医院中医科，广东 汕头 515041)

松果菊苷对人肝癌细胞HepG2生长和缝隙连接细胞通讯的影响※

杨晓寰

(汕头大学医学院第一附属医院中医科，广东 汕头 515041)

目的 观察松果菊苷(ECH)对人肝癌细胞HepG2生长和缝隙连接细胞通讯(GJIC)的影响。方法 Alamar Blue法绘制HepG2细胞生长曲线，并检测ECH的细胞毒作用；划痕标记染料示踪技术(SL/DT)法观察空白对照组、API阳性对照组、AGA阴性对照组和ECH组对GJIC的影响；异硫氰酸荧光素(FITC)间接免疫荧光法观察ECH对缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。结果 HepG2细胞在20 000个/mL的细胞密度Alamar Blue还原率与时间有线性关系。ECH(5、10、20、40和80 μM)处理HepG2细胞24 h，细胞存活率分别为(92.69±3.35)%、(88.33±2.12)%、(80.97±2.50)%、(76.95±1.40)%和(69.09±1.11)%(P<0.01)。抑制率最高(80 μM浓度下)为30.91%。IC50为467.8 μM(368.3 μg/mL)。SL/DT显示阳性对照芹黄素和ECH处理24 h后，荧光染料在划痕外4列细胞出现了明显荧光(++++)，说明细胞出现染料传输的现象。间接免疫荧光法对Cx43表达进行计分，空白对照组细胞得分为(1.40±0.55)分，ECH组得分为(1.60±0.55)分。结果表明ECH组的Cx43表达增强不明显。结论 ECH对HepG2细胞有细胞毒作用，同时可增强GJIC功能，但Cx43表达不明显，为ECH抗肿瘤机制提供依据。

肝肿瘤，实验性;病理学;皂苷类；基因表达；细胞间通讯

恶性肿瘤是现今全世界最主要的发病和致死原因，每年癌症新发病例约1 400万，死亡约800万，2015年因癌症死亡人数占全球死亡数的1/6，造成男性死亡的5种最常见癌症依次为肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌及前列腺癌，造成女性死亡的5种最常见癌症依次为乳腺癌、肺癌、结直肠癌、宫颈癌及胃癌，我国新发癌症病例和死亡人数均居世界首位[1]。如何有效防治恶性肿瘤仍然是当前研究的热点。缝隙连接(gap junction,GJ)是相邻细胞间作用的直接通道。缝隙连接细胞通讯(gap junctional intercellular communication，GJIC)是指直径<1.5 nm、分子量<1 kDa的小分子物质或水溶性的细胞代谢物能通过缝隙连接通道进行物质和能量交换，从而调节细胞的增殖、分化和凋亡等生命活动。肿瘤形成的一个重要原因在于相邻的肿瘤细胞间及肿瘤细胞与相邻正常细胞间出现的缝隙连接功能的异常或缺失[2]。中医药具有毒副作用少的优点，肉苁蓉具有补益机体阳气，提高肿瘤患者机体免疫力的作用[3]。本研究观察了肉苁蓉的主要活性成分松果菊苷(ECH)对HepG2细胞的增殖抑制作用和对肿瘤细胞缝隙连接功能的影响，结果如下。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 ECH为中国药品生物制品检定所的对照品，18-α甘草酸(AGA)和芹黄素(API)为Sigma公司产品，以上纯度均>98%(高效液相色谱法)。Alamar Blue为AbD公司产品，细胞培养液RPMI-1640和0.25%含乙二胺四乙酸(EDTA)胰酶的消化液为GIBCO公司产品，新生牛血清为杭州四季青公司产品。E……