田路路，孟庆玲，乔 军，陈 诚，刘田莉，卢海亭，张星星，贡莎莎，才学鹏 ，陈创夫

(1.石河子大学 动物科技学院,新疆石河子 832003; 2.中国农业科学院 兰州兽医研究所,兰州 730046)

绵羊肺炎支原体多表位融合基因 MO-meAg1的构建、表达及重组蛋白免疫原性分析

田路路1，孟庆玲1，乔 军1，陈 诚1，刘田莉1，卢海亭1，张星星1，贡莎莎1，才学鹏2，陈创夫1

(1.石河子大学 动物科技学院,新疆石河子 832003; 2.中国农业科学院 兰州兽医研究所,兰州 730046)

为获得具有良好免疫原性的绵羊肺炎支原体(MO)重组蛋白，利用ABCpred等软件预测分析MO EF-P、PDHA、P97相似蛋白和EF-Ts蛋白的优势线性抗原表位，构建多表位融合基因 MO-meAg1，合成后将其亚克隆至表达载体pET-32a(+)，构建原核表达载体pET-32a(+)- MO-meAg1。将pET-32a(+)- MO-meAg1转化至感受态细胞E.coliBL21(DE3)，IPTG诱导表达后检测重组蛋白反应原性和免疫原性。SDS-PAGE结果显示，MO-meAg1重组蛋白分子质量约34.5 ku；Western blot分析结果显示，该重组蛋白可被MO阳性血清特异性识别，具有良好的反应原性。小鼠免疫试验结果表明，重组蛋白MO-meAg1具有较强的免疫原性，诱导机体产生的抗血清其间接血凝效价可达1∶128以上。获得的多表位融合蛋白MO-meAg1为绵羊支原体肺炎的免疫学诊断及新型疫苗研究奠定基础。

绵羊肺炎支原体；抗原表位；多表位融合基因；表达

支原体是迄今为止已知的一类缺少细胞壁并能够自我复制的最小原核微生物。中国目前流行的羊支原体肺炎主要是由绵羊肺炎支原体(Mycoplasmaovipneumoniae,MO)引起的，绵羊或山羊均有易感性，其主要感染1～3月龄羔羊。支原体感染可引起绵羊或山羊出现胸膜肺炎，临床症状主要表现为流鼻涕、咳嗽、呼吸困难、生长发育迟缓、渐进性消瘦等[1-2]，感染MO的羊主要出现肺间质增生性肺炎[3]。……