汪元元,张 帆

(皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 病理科，安徽 芜湖 241001)

芜湖地区人乳头瘤病毒的亚型分布及其与年龄分层的相关性研究

汪元元,张 帆

(皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 病理科，安徽 芜湖 241001)

目的：了解芜湖地区不同年龄段女性宫颈组织中21种人乳头瘤病毒(HPV)感染情况，探讨有针对性的防治策略。方法：对2015年1～12月在皖南医学院弋矶山医院就诊的11 779例女性的宫颈分泌物标本应用多聚酶链反应(PCR) 体外扩增和DNA膜杂交法进行HPV基因分型检测，并对所得数据运用统计学分析。结果：11 779例受检者中，阳性2284例，感染率为19.39%；其中单一感染最多，为1802例(15.30%)，双重感染364例(3.09%)，多重感染118例(1.00%)；46～50岁年龄段的检出阳性率最高(29.69%)，且与各年龄组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其他各年龄段感染HPV阳性率随着年龄增长基本呈缓慢上升趋势；研究发现本地区患者中，主要感染HPV高危亚型为16、52及58，低危亚型为11。结论：本地区HPV感染亚型和年龄段分布具有一定的地域特点。本研究结果可为本地区宫颈病变的早发现、早诊断、早治疗及早预防和HPV 疫苗的使用等提供重要的参考。

人乳头瘤病毒;基因分型;年龄分层

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2017.03.019

人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是世界范围内最常见的性传播感染病毒，与许多良恶性肿瘤相关，是与癌症发生有关的第二大传染性病原体，仅次于幽门螺杆菌[1]。当前发现的HPV亚型已有上百种，我院临床上主要检测与宫颈癌相关的高危型13种，低危型5种以及中国人好发的高危亚型3种。有研究表明HPV不同亚型感染具有年龄和区域差异性[2]，因此本研究基于本地区女性HPV感染的现状以及年龄进行回顾性分层研究，为宫颈癌的防治及HPV疫苗在本地区的使用提供流行病学参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1～12月到本院妇科就诊并进行HPV分型筛查的女性12 068例，除去年龄未知的女性289例，有效资料为11 779例，年龄18～80岁，平均(49 ±3.15)岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 均由妇科医生以阴道窥器充分暴露宫颈，再用无菌生理盐水棉签拭去宫颈口分泌物后，用专用的宫颈刷置于宫颈口轻轻顺时针旋转5圈，慢慢取出后将标本置于有细胞保存液并有编号的取样管中并送检。

1.2.2 试剂及仪器 HPV分型检测试剂盒购自潮州凯普生物化学有限公司，可检测21种HPV亚型，包括16种高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、53、CP8304，5种低危型：6、11、42、43、44；检测仪器为Roche生物技术公司的LightCycler480系统。

1.2.3 操作步骤 DNA分离提取 取含0.5 mL宫颈细胞的保存液，离心后弃上清液并用细胞裂解液提取DNA。PCR扩增：取1 μL DNA样本作为模板进行PCR扩增。杂交洗膜显色严格按照试剂盒说明书进行膜条杂交、洗涤、显色，最后观察结果。

1.2.4 结果及判读标准 检测结果阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点。根据膜条HPV分型分布图，判断阳性点为何种HPV病毒类型。Biotin对照点反应酶与显色底物反应，在检测中应为阳性。内对照(IC)为质控模板DNA探针，若扩增反应体系中没有抑制因素，IC点出现。以上两对照点为阳性，其他点为阴性，则判定本次检测结果为阴性；如果有一个或一个以上HPV分型点为阳性，代表该次检测结果为阳性(见图1～4)。

图1 膜条HPV分型分布图

1.2.5 年龄分层依据 本研究为了更好地统计不同年龄段女性HPV感染的异质性，将年龄区间为18～80岁的11 779例受检女性，按组距为5(岁)，分为10个年龄段。

1.3 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件包进行数据分析，其中计数资料采用例数或百分比(%)表示。不同年龄段人群HPV感染率的组间比较采用χ2检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

图2 HPV2阳性对照图1种亚型

图3 单一感染(16型)

图4 双重感染(52、58型)

2 结果

2.1 各年龄组人群HPV感染年龄分布情况 11 779例受检女性中有2284例感染者，总阳性率为19.39%。41～45 岁年龄段的感染者最多，为504例(24.55%)；但46～50岁年龄段的检出阳性率最高(29.69%)。其他各组随着年龄的增加，感染率有逐渐增长趋势，且各年龄段感染率比较差异有统计学意义(χ2=18.68，P=0.03)。见表1。

2.2 各年龄组人群HPV单一及多重感染情况 各年龄组均以单一感染为主，多重感染较少。在所有感染者中，单一感染占78.90%，其中≥60岁组比率最高(86.96%)；双重感染占15.94%，21～25岁组构成比较其他组高(22.68%)；多重感染占5.16%，且以56～60岁组最多(10.00%)。多重感染中以三重为主，三重以上感染则少见。见表2。

表1 HPV感染年龄分布情况

年龄/岁阳性阴性总例数阳性率/%≤205354012．5021～259762972613．3626～302671257152417．5231～352701365163516．5136～403651730209517．4241～455041549205324．5546～504761127160329．6951～551911266145713．1156～604021525515．69≥616932239117．65合计228494951177919．39

表2 各年龄组HPV单一及多重感染构成情况

年龄/岁单一感染/n(%)双重感染/n(%)多重感染/n(%)感染总例数≤204(80．00)1(20．00)0(0．00)521～2571(73．20)22(22．68)4(4．12)9726～30214(80．15)41(15．36)12(4．49)26731～35213(78．89)45(16．67)12(4．44)27036～40298(81．64)51(13．97)16(4．39)36541～45402(79．76)76(15．08)26(5．16)50446～50361(75．84)87(18．28)28(5．88)47651～55146(76．44)32(16．75)13(6．81)19156～6033(82．50)3(7．50)4(10．00)40≥6160(86．96)6(8．70)3(4．34)69合计1802(78．90)364(15．94)118(5．16)2284

2.3 HPV各基因亚型结果分析 在2284例感染者中，主要感染HPV高危亚型依次为16、52及58，低危亚型为11。由于检测标本存在单重和多重感染，故2284例实际检出亚型频数为2937。因此16、52、58亚型的检出率分别为16.75%、15.80%、11.17%；亚型11的检出率为1.19%。受检人群中以感染高危型为主，频数为2855，低危型少见，频数为82。见表3。

3 讨论

HPV感染致病性广泛，是宫颈病变的重要因素。有研究显示HPV检测与细胞学检测相比，能更早期地发现持续性HPV感染的相关病变[3]。在2015年美国阴道镜和宫颈病理学会(ASCCP)临时指南推荐将HPV基因分型用于原发性宫颈癌的筛查，并建议女性筛查年龄≥25岁[4]。HPV疫苗(16型和18型)2016年获得中国食品药品监督管理总局(CFDA)的上市许可，并在9～25岁女性中接种，这成为国内第一个获批用于预防宫颈癌的HPV疫苗。研究表明，HPV疫苗不仅对宫颈病变有预防和保护作用，还可能会改变宫颈癌前病变及宫颈癌发生的自然史[5]。国内外研究显示，HPV感染存在地区、种族以及亚型的差异，本研究针对此进行探讨，使HPV疫苗研制及使用更精准，能覆盖更多人群，以减少宫颈疾病的发生率。

表3 HPV各基因亚型检测结果

年龄/岁HPV高危型HPV低危型161831333539455152565859685366Cp8304611424344≤2010010100111000000000021～25218663523206162412550211126～30531519239155184854231821111731001031～355013172382362662739510238165402036～4074212134433338721657613249193301641～45111333335629845115225314246015313501246～501202629441342104782147616113117356812251～5540131210416214391027711174181311156～60822121122282381500001≥6114442131523391263110000合计49213514317950168381984648632856962027314722353913

在本研究中本地区HPV感染总阳性率为19.39%，较国内其他地区均不同，这可能是由于我国气候环境、生活习惯以及生活水平的差异等造成的地区差异性。HPV感染可发生于各年龄段，与年龄具有相关性[6]。本研究中HPV感染主要发生在26～55岁，其中46～50岁年龄段的检出阳性率最高(29.69%)，与其他大部分学者研究结果的“U”字型分布不同。原因可能为存在选择偏倚，加之本研究中青年女性总频数较少，以及检测仪器、试剂灵敏度、研究组距的选定等不同对研究结果有一定影响，使得≤20岁组以及21～25岁组感染率均较低。由于50岁以后本身抵抗力和激素水平的变化，虽然阳性率有所下降但仍偏高。

本研究中，单一感染为优势感染(1802例)，阳性率达15.30%，占总感染数的78.90%，双重感染364例，占15.94%，多重感染118例，占5.16%。其中≥61岁组单一感染构成比最高，达86.96%；21～25岁组双重感染构成比较其他组高，为22.68%；多重感染构成比则以56～60岁组(10.00%)最多。单一感染中高危型与低危型感染比例为39.95∶1(1758∶44)；双重感染中纯高危与纯低危感染的比例为104.67∶1(341∶3)；多重感染中纯高危与高危-低危混合及纯低危感染比例为108∶9∶1。表明双重和多重感染中以纯高危型感染为主，高危型和低危型混合及纯低危型感染少见。李涅等[7]认为，多重HPV感染使宫颈癌患病风险增加31.8倍，单一感染使其患病风险增加19.9倍。因此，针对多重感染的防治显得尤为重要，特别是多重感染较高的年龄组。

在HPV亚型分布的研究中，21种亚型均出现，其中高危型频数由高到低为16(16.75%)、52(15.80%)、58(11.17%)、53(6.88%)、51(6.74%)、33(6.09%)等，低危型中以11型频数最高，6型次之。这与魏琦等[8]关于安徽省HPV主要感染亚型研究一致，但与李旭艳[9]研究的惠州地区常见的HPV亚型主要为52、58、16 和11(低危)以及聂双双等[10]报道的成都地区常见的HPV亚型以16、18、58和6(低危)为主不同。表明HPV感染亚型具有明显地域特点。研究发现，虽然HPV16型是最多见的亚型，但在中年组中52型却高于16型。所以，对于中年组HPV感染要加强52型的筛查。而西方国家较常见的18型则排在第十位，频数为135(5.90%)，属于较少见型别。因此，研究针对HPV16+52+58型的三价疫苗，对减少本地区女性HPV感染率有重要价值，而不能盲目照搬西方国家的研究。

综上所述，本研究结果可为本地区宫颈病变预防、监测和HPV 疫苗的使用等提供重要的参考。掌握HPV不同亚型与各年龄段的感染关系及特点，了解HPV感染的区域差异性，对每个年龄段给予适用的防治方法，对女性的健康尤为重要。

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Distribution of and age-related human papillomavirus subtypes in women in Wuhu area

WANG Yuanyuan,ZHANG Fan

Department of Clinical Pathology,The First Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241001，China

Objective：To investigate the cervical prevalence of 21 types of human papillomavirus(HPV) in women at different ages in Wuhu area for planning effective preventive strategies.Methods:Cervical secretions were obtained from 11 779 women undergone diagnosis in our hospital between January and December of 2015,and detected with polymerase chain reaction(PCR) for HPV genotyping via in vitro amplification and DNA hybridization.The results were analyzed with statistics.Results:In 11 779 cases,positive findings were seen in 2284(19.39%).Infection with single HPV subtype was found in 1802 cases(15.30%),double subtypes in 364(3.09%) and multiple infections in 118(1.00%).Women aged from 41 to 45 years had the highest positive findings(29.69%),and the infection was statistically correlated with age groups(P<0.05).Infection rate in remaining age groups was increased with years of age.Higher risk HPV subtypes in women in Wuhu area included 16,52 and 58,and low-risk subtype was associated with 11.Conclusion:HPV infection in women in Wuhu area has age-related distribution trends.Our findings may supply the evidence for early screening,diagnosis and treatment of HPV infection as well as use of HPV vaccine for prevention purpose in women in the local area.

human papillomavirus;genotype;age stratification

1002-0217(2017)03-0262-04

2016-11-08

汪元元(1990-)，女，2015级硕士研究生，(电话)18255386960，(电子信箱)18255386960@163.com； 张 帆，男，主任医师，硕士生导师，(电子信箱)zhangfan401401@aliyuncom，通信作者。

R 737.33

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